[發明專利]表達雞α-干擾素的大腸桿菌及其應用

無效

• 申請號: 201010295927.4
• 申請日: 2010-09-29
• 公開（公告）號: CN101974477A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 馬鳳龍;崔增學;李春榮;劉煥珍;石喬
• 申請（專利權）人: 崔增學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/21;C12P21/02;A61K38/21;A61K9/08;A61P31/14;C12R1/91
• 代理公司: 北京康盛知識產權代理有限公司 11331
• 代理人: 張良

1.表達雞α-干擾素的重組菌，是穩定表達序列表中序列1第94-582位所示的DNA分子編碼的蛋白的重組大腸桿菌。

2.根據權利要求1所述的重組菌，其特征在于：所述大腸桿菌為大腸桿菌菌株M15[pREP4]。

3.生產雞α-干擾素蛋白的方法，包括如下步驟：

將表達雞α-干擾素的重組菌進行培養，誘導表達雞α-干擾素，收集菌體，破碎菌體，離心收集包涵體，洗滌包涵體，離心收集包涵體；

用含有5-8mol/L鹽酸胍的緩沖溶液溶解包涵體，離心收集上清；

采用His-蛋白質鎳親和層析樹脂純化上清，收集目的蛋白峰；

測定收集的蛋白濃度，在冰水浴或者2℃-8℃的條件下，將收集的蛋白加入到復性液中使蛋白質濃度在100-200μg/mL，14℃-16℃靜置復性20-24小時。所述復性液中鹽酸胍0.3-1.0mol/L、尿素0.5-2.0mol/L、精氨酸0.1-1.0mol/L、還原型半胱氨酸1.0-7.0mmol/L、氧化型胱氨酸0.1-2.0mmol/L、Tris-HCl?10-20mmol/L(pH8-11)、EDTA?1.0-5.0mmol/L(pH8.0)；

采用離子柱對上述復性后的溶液進行純化、透析，獲得雞α-干擾素蛋白；

所述表達雞α-干擾素的重組菌是穩定表達序列表中序列1第94-582位所示的DNA分子編碼的蛋白的重組大腸桿菌。

4.根據權利要求3所述的生產雞α-干擾素蛋白的方法，其特征在于：所述大腸桿菌為大腸桿菌菌株M15[pREP4]。

5.雞α-干擾素蛋白注射液，其活性成分為權利要求3所述生產雞α-干擾素蛋白的方法制備的雞α-干擾素蛋白。

6.根據權利要求5所述的雞α-干擾素蛋白注射液，其特征在于：含有佐劑和/或穩定劑。