[發明專利]一種吸水鏈霉菌抗真菌活性物質的提取方法

有效

• 申請號: 201010294417.5
• 申請日: 2010-09-27
• 公開（公告）號: CN101979609A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 劉訓理;張楠;毛志泉;宋振;張本峰;于建;國輝;仇念全
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12P1/06
• 分類號: C12P1/06;B01D15/02;C12R1/55
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種吸水鏈霉菌抗真菌活性物質的提取方法。屬于生物制藥技術領域。

背景技術

本發明的目的在于提取吸水鏈霉菌BS-112發酵產生的抗真菌活性物質用于防治糧食及飼料中的黃曲霉、赭曲霉、黑曲霉等主要霉變真菌。

霉菌毒素是真菌所產生的次級有毒代謝物，它們存在于絲狀真菌的菌絲體和孢子內，廣泛污染糧食、食品及飼料等。據聯合國糧農組織估算，目前世界上至少有25％的谷物被霉菌毒素污染，每年所造成的經濟損失高達數千億美元。我國是霉菌毒素的重災區，一些地區尤其是南方地區飼料霉變問題相當嚴重。由于霉菌的生長消耗了飼料中的營養物質，飼料受霉菌污染后，營養價值嚴重降低。動物采食了霉菌毒素污染的飼料后，可引起霉菌毒素中毒，生長受到抑制，飼料利用率降低，產仔數降低，禽類的產蛋率和孵化率下降等。而且攝入動物體內的霉菌毒素能夠破壞畜禽的代謝解毒器官，降低其免疫力和對疾病的抵抗力。更為嚴重的是，霉菌毒素可沉積在動物的肝、腎、肌肉、乳汁及禽蛋等動物產品中，通過食物鏈對人類健康產生極大的潛在危害。因此如何預防和控制飼料中的霉菌毒素，降低其危害，已成為國內外研究的熱點。

目前人們主要通過控制水分和低溫等技術處理糧食及其制品來防止霉菌生長，并通過物理、化學的方法消減霉菌毒素含量。但是這些方法具有破壞營養、去毒不徹底和成本高等缺陷，從而造成實際防控、脫毒效果不理想。利用生物技術防控、消減霉菌毒素不僅不破壞食物的營養成分，而且無殘留毒性、不污染環境和對人畜安全。目前相關的研究主要集中在篩選、利用拮抗微生物及植物產生的抗菌物質來防控糧食及其制品的霉變，如變色栓菌(Trametes?versicolor)產生一類抑制寄生曲霉產毒的物質可有效地防治玉米、小麥的霉變；Ono等從鏈霉菌中提取了一種能抑制黃曲霉毒素產生的物質，該物質與殺稻瘟素結構類似。吸水鏈霉菌Streptomyces?hygroscopicus?BS-112由本實驗室從泰山林地土壤中分離獲得，該菌株對黃曲霉、赭曲霉、黑曲霉等糧食和飼料中常見的霉菌具有較強拮抗作用，發酵性狀優異，產生的抗真菌活性物質性質穩定，具有作為飼料和糧食防腐劑的潛力。另外，該菌株產生的抗真菌活性物質還對白僵菌、綠僵菌、黃曲霉等家蠶病原真菌及立枯絲核菌等植物病原真菌也具有較好的抑制作用。

發明內容

本發明提供了一種吸水鏈霉菌抗真菌活性物質的提取方法。

本發明采用如下技術方案實現：一種吸水鏈霉菌，該菌株表述為吸水鏈霉菌(Streptomyces?hygroscopicus)BS-112。已于2009年12月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱為CGMCC，地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所。郵編：100101)，保藏號為CGMCC?No.3504。

本發明的BS-112菌株是從泰山林地土壤中篩選得到的，該菌株對糧食及飼料中常見霉變真菌(黃曲霉、赭曲霉、黑曲霉、煙曲霉、米曲霉)、家蠶病原真菌(白僵菌、綠僵菌、黃曲霉)及植物病真菌(番茄灰霉病菌、煙草炭疽病菌、立枯絲核菌、蘋果輪紋病菌、楊樹腐爛病菌)等均有較好的抑制效果，且該菌株具有良好的傳代抑菌穩定性。BS-112菌株具有以下特征：①高氏一號培養基上氣生菌絲白色，日久成灰色，并有明顯的吸水斑，基內菌絲淡黃色，可溶性色素黑色；②孢子絲呈緊密螺旋形，孢子為卵圓形，孢子表面有疣。③生理生化特征為：能使牛奶凝固，淀粉水解，產生硫化氫；可以在15～40℃環境下生長，最適生長溫度為28℃，存活pH值為4～10，耐鹽性較好；可以利用葡萄糖、麥芽糖、甘油、木糖、果糖、蔗糖、肌醇、甘露醇、醋酸鈉和棉子糖；④16S?rDNA序列分析結果在GenBank數據庫中進行序列最大同源性比對，發現BS-112菌株與鏈霉菌屬的遺傳距離最近，與已知菌株鏈霉菌32(2)(EF063464)的16S?rDNA序列同源性達到99.87％。

通過對BS-112菌株的形態特征、培養特征、生理生化特征、細胞壁組分及16S?rDNA序列分析，確定其為吸水鏈霉菌(Streptomyces?hygroscopicus)。

本發明的目的是給出吸水鏈霉菌BS-112抗真菌活性物質的提取方法，本發明利用大孔吸附樹脂法提取BS-112菌株產生的抗真菌活性物質，具有設備簡單、操作方便、生產周期短、成本低等優點，利于工業化生產。該抗真菌活性物質對糧食及飼料中的主要霉變真菌具有高效廣譜抗性，具有作為食品和飼料防腐劑的潛力。此外，該抗真菌活性物質還對多種家蠶及農作物的病原真菌具有較好的抑制作用，在養蠶業及農業上也具有潛在應用價值。