[發(fā)明專利]冷凍法提取棘皮動物變態(tài)前幼體DNA的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010291347.8 | 申請日： | 2010-09-26 |
| 公開（公告）號： | CN102409038A | 公開（公告）日： | 2012-04-11 |
| 發(fā)明（設計）人： | 常亞青;趙新亞;丁君 | 申請（專利權(quán)）人： | 大連海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 大連非凡專利事務所 21220 | 代理人： | 曲寶威 |
| 地址： | 116023 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 冷凍 提取 棘皮動物 變態(tài) 幼體 dna 方法 | ||
【權(quán)利要求書】：
1.一種冷凍法提取棘皮動物變態(tài)前幼體DNA的方法，其特征在于：步驟如下：
a、在解剖鏡下用微量移液器取棘皮動物幼體放入離心管中，并在-80℃條件下冷凍保存；
b、將裝有棘皮動物幼體的離心管取出解凍，并在解凍后10分鐘內(nèi)向離心管中加入15ul裂解液，1ul的0.3mg/ml的蛋白酶K，然后放入55℃水浴鍋中裂解3小時，期間每隔半小時振蕩搖勻一次；所述裂解液的組分及終濃度為10mmol/LTris-Cl，50mmol/L?KCL，0.5％Tween-20，PH8.0；
c、裂解完后把水浴鍋溫度升至85℃，水浴15分鐘，以滅活蛋白酶K；裂解完的樣品直接用于PCR擴增，獲取擴增產(chǎn)物，微衛(wèi)星擴增PCR體系組成如下：
反應體系??????需加體積
DNA模板???????1ul
10×buffer????2.5ul
引物??????????1.0ul/each
d?NTP?????????2.2ul
MgCl2?????????1.5ul
Taq???????????0.35ul
dd?H2O????????15.45ul
Total?????????25ul。
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