[發明專利]一種鴨疫里默氏桿菌LAMP檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201010290683.0
• 申請日: 2010-09-21
• 公開（公告）號: CN102409084A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 于圣青;韓先干;丁鏟;胡青海;陳鴻軍;仇旭升;宋翠萍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 上海百一領御專利代理事務所(普通合伙) 31243
• 代理人: 馬育麟

1.一種鴨疫里默氏桿菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于其包含3對引物：F3和B3；FIP和BIP；LF和LB，其中所述F3的核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述B3的核酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述FIP的核酸序列如SEQ?IDNO.3所示，所述BIP的核酸序列如SEQ?ID?NO.4所示，所述LF的核酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，所述LB的核酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。

2.根據權利要求1所述的鴨疫里默氏桿菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于其還含有熒光染料、10×反應緩沖液、DNA聚合酶、dNTP、甜菜堿。

3.根據權利要求2所述的鴨疫里默氏桿菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于所述熒光染料為能與雙鏈DNA結合產生熒光的染料。

4.根據權利要求3所述的鴨疫里默氏桿菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于所述熒光染料為溴化乙錠、SYBR?Green?I熒光染料或Hoechst?33258中之一。

5.根據權利要求3所述的鴨疫里默氏桿菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于所述熒光染料為SYBR?Green?I熒光染料。

6.一種鴨疫里默氏桿菌的檢測方法，包括下列步驟：

a)取禽類的體液或組織液并以此為模板；

b)利用3對引物：F3和B3；FIP和BIP；LF和LB進行LAMP反應，其中所述F3的核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述B3的核酸序列如SEQ?IDNO.2所示，所述FIP的核酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，所述BIP的核酸序列如SEQ?ID?NO.4所示，所述LF的核酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，所述LB的核酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，反應條件為94℃5分鐘，0℃20秒，65℃?20-60分鐘，80℃滅活；

c)檢測LAMP反應產物。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于所述禽類為鴨、火雞、雞或鳥類中任何之一。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于步驟b中所述反應條件為94℃5分鐘，0℃20秒，65℃20分鐘，80℃滅活。

9.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于步驟c中所述檢測LAMP反應產物的方法為瓊脂糖凝膠電泳法、熒光顯色法或分光光度計法。

10.根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于所述熒光顯色法為SYBRGreen?I熒光顯色法。