[發(fā)明專利]具有透皮能力和白細(xì)胞介素-10活性的融合蛋白及其編碼基因與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010290087.2
• 申請日: 2010-09-21
• 公開（公告）號: CN101962413A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖衛(wèi)華;郭雨剛;溫龍平;張力;康文瑤;滿娜;李光偉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12P21/02;A61K48/00;A61K38/20;A61K47/48;A
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.一種融合蛋白，是在人白細(xì)胞介素10蛋白的羧基末端連接如下任一所述蛋白，且在氨基末端連接轉(zhuǎn)運(yùn)肽形成的融合蛋白：

1)人IgG?Fc-γ1或其突變蛋白；

2)人IgG?Fc-γ2或其突變蛋白；

所述人白細(xì)胞介素10蛋白的氨基酸序列為序列表中序列2自氨基末端第12-171位的氨基酸序列；

所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽的氨基酸序列為序列表中序列2自氨基末端第1-11位的氨基酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白為如下1)或2)的蛋白：

1)序列表中的序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白；

2)將序列2的氨基酸序列經(jīng)過幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有透皮能力和人白細(xì)胞介素10活性的由1)衍生的蛋白。

3.權(quán)利要求1或2所述融合蛋白的編碼基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述融合蛋白的編碼基因，其特征在于：所述融合蛋白的編碼基因是下述1)-4)中任一所述基因：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)序列表中序列1自5’末端第256-1464位核苷酸所示的DNA分子；

3)與1)或2)限定的DNA分子具有90％以上同源性且編碼具有透皮能力和人白細(xì)胞介素-10活性蛋白所示的DNA分子；

4)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA分子雜交的且編碼具有透皮能力和人白細(xì)胞介素-10活性蛋白所示的DNA分子。

5.含有權(quán)利要求3或4所述融合蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、表達(dá)盒或重組菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組表達(dá)載體，其特征在于：

所述重組表達(dá)載體為將權(quán)利要求3或4所述融合蛋白的編碼基因插入如下任一出發(fā)載體的多克隆位點(diǎn)得到的載體：pPIC9K、pPIC9、pPIC3、pPICZα、pHIL-D1、pA0804、pA0815或pPSC3K。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌，其特征在于：所述重組菌為將權(quán)利要求5或6所述的重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主菌得到的重組菌，所述宿主菌優(yōu)選為畢氏酵母，所述畢氏酵母尤其優(yōu)選為GS115、KM71或SMD1168。

8.一種制備權(quán)利要求1或2所述融合蛋白的方法，包括如下步驟：

1)誘導(dǎo)培養(yǎng)權(quán)利要求5或7所述重組菌，離心收集上清液；

2)純化步驟1)獲得的上清液，得到融合蛋白；

在步驟1)中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的溫度為30℃，所述誘導(dǎo)所用的培養(yǎng)基為添加有甲醇的培養(yǎng)基，所述甲醇在所述誘導(dǎo)所用的培養(yǎng)基中的濃度為0.5％(體積百分含量)，所述誘導(dǎo)方式為：每隔24h補(bǔ)加甲醇至終濃度為0.5％(體積百分含量)；

在步驟2)中，所述純化的方式為：依次進(jìn)行親和層析和分子篩層析，所述親和層析的層析柱優(yōu)選為Mabselect，所述分子篩層析的層析柱優(yōu)選為S200HR預(yù)裝柱；

所述親和層析的洗脫液為濃度為50mM、pH為3.5的醋酸鈉水溶液；

所述分子篩層析的洗脫液由17.55g氯化鈉和1000ml濃度為20mM、pH為8.0的Tris·HCl緩沖液組成。

9.權(quán)利要求1或2所述的融合蛋白在制備治療自身免疫性疾病藥物中的應(yīng)用；或權(quán)利要求3或4所述融合蛋白的編碼基因在制備治療自身免疫性疾病藥物中的應(yīng)用；或權(quán)利要求1或2所述的融合蛋白在制備抑制IFN-γ產(chǎn)生的抑制劑中的應(yīng)用；或權(quán)利要求3或4所述融合蛋白的編碼基因在制備抑制IFN-γ產(chǎn)生的抑制劑中的應(yīng)用；

所述自身免疫性疾病優(yōu)選為銀屑病。

10.一種治療自身免疫性疾病藥物，其活性成分為權(quán)利要求1或2所述的融合蛋白、權(quán)利要求3或4所述融合蛋白的編碼基因或權(quán)利要求5或6所述的重組表達(dá)載體；

一種抑制IFN-γ產(chǎn)生的抑制劑，其活性成分為權(quán)利要求1或2所述的融合蛋白、權(quán)利要求3或4所述融合蛋白的編碼基因或權(quán)利要求5或6所述的重組表達(dá)載體。