[發明專利]一種重組人骨形態發生蛋白-2成熟肽的生產方法

有效

• 申請號: 201010284844.5
• 申請日: 2010-09-09
• 公開（公告）號: CN102336829A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 郭旺明;朱晴羽;王同映
• 申請（專利權）人: 杭州九源基因工程有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐關壽

1.一種重組人骨形態發生蛋白-2成熟肽的純化生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將復性好的重組人骨形態發生蛋白-2成熟肽溶液上樣于經平衡好的疏水層析柱，上樣完畢后繼續用平衡緩沖液沖洗到達基線，所述的平衡緩沖液包含10-30mM?2-環己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺、1-3M氯化鈉或者硫酸銨，pH為7.0-9.0；

(2)用洗脫緩沖液進行鹽濃度逐步降低的階梯梯度洗脫，收集目標峰，所述的洗脫緩沖液包含10-30mM?2-環己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺，pH為7.0-9.0。

2.根據權利要求1所述的純化生產方法，其特征在于，所述的疏水層析柱介質選自苯基瓊脂糖凝膠，丁基瓊脂糖凝膠，辛基瓊脂糖凝膠，乙基聚合樹脂，異丙基聚合樹脂或苯基聚合樹脂。

3.根據權利要求1所述的純化生產方法，其特征在于，所述的平衡緩沖液和洗脫緩沖液中含有10-50mM三羥甲基氨甲烷-HCl。

4.根據權利要求1所述的純化生產方法，其特征在于，所述的純化方法是多步疏水作用層析，一步疏水層析得到的目標峰再經1-2次疏水層析，收集目標峰。

5.根據權利要求1所述的純化生產方法，其特征在于，所述的純化方法為疏水作用層析和離子交換層析聯合使用。

6.根據權利要求5所述的純化生產方法，其特征在于，所述的?離子交換層析為陰離子交換層析聯用，層析介質為Q瓊脂糖凝膠快速流(Q-sepharose?Fast?Flow)、Q瓊脂糖凝膠高分辨率(Q-sepharoseHP)或者Q聚合樹脂(SOURCE?15Q，SOURCE?30Q)。

7.根據權利要求6所述的純化生產方法，其特征在于，所述方法除疏水層析步驟外，還包含以下步驟：

(1)將疏水層析得到的目標峰經平衡緩沖液稀釋后，上樣于經平衡好的陰離子交換層析柱，上樣完畢后繼續用平衡緩沖液沖洗到達基線，所述的平衡緩沖液包含10-50mM三羥甲基氨甲烷-HCl、10-30mM?2-環己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素和2-10％N，N-二甲基甲酰胺，pH為8.0-9.0；

(2)用洗脫緩沖液進行鹽濃度逐步增加的梯度進行洗脫，收集主峰，所述的洗脫緩沖液包含10-50mM三羥甲基氨甲烷-HCl、10-30mM2-環己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素和2-10％N，N-二甲基甲酰胺、1-3MNaCl，pH為8.0-9.0。

8.根據權利要求5所述的純化生產方法，其特征在于，所述的離子交換層析為陽離子交換層析聯用，層析介質為羧甲基瓊脂糖凝膠快速流(CM-Sepharose?Fast?Flow)。

9.根據權利要求8所述的純化生產方法，其特征在于，所述方法除疏水層析步驟外，還包含以下步驟：

(1)將疏水層析得到的目標峰經平衡緩沖液稀釋后，上樣于經平衡好的陽離子交換層析柱，上樣完畢后繼續用平衡緩沖液沖洗到達基線，所述的平衡緩沖液包含10-50mM磷酸二氫鈉-HCl、10-30mM?2-?環己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺，pH為6.0-6.5；

(2)用洗脫緩沖液進行鹽濃度逐步增加的梯度進行洗脫，收集主峰，所述的洗脫緩沖液包含10-50mM磷酸二氫鈉-HCl、10-30mM?2-環己胺基乙磺酸、0.2-1M尿素、2-10％N，N-二甲基甲酰胺、1-3M?NaCl，pH為6.0-6.5。?