[發明專利]一種粘桿菌素高產菌株及其篩選方法

無效

• 申請號: 201010284048.1
• 申請日: 2010-09-17
• 公開（公告）號: CN101974452A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 李琪;李建梅;袁昉;王培培;李敏
• 申請（專利權）人: 河北圣雪大成制藥有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

1.一種粘桿菌素高產菌株，其特征在于所述菌株保藏名稱為DCLL488，保藏單位CGMCC，保藏編號為CGMCC?NO：4099，保藏日期2010年08月24日。

2.一種權利要求1所述的高產菌株的篩選方法，其特征在于它依次包括以下步驟：

a、將粘桿菌素芽孢桿菌接種于活化培養液中，在溫度28℃-37℃，搖床轉速為200rpm，活化培養20h?36h，制成成熟活化菌液；活化培養液的組成為：以質量百分配比計，葡萄糖1％-5％、酵母粉1％-5％、氯化鈉0.3％-1.0％，水余量；pH6.5-7.0；

b、取成熟活化菌液，加入體積質量比濃度為0.5mg/ml、水溫為40℃-55℃的乙硫氨酸或甲硫氨酸水溶液，進行稀釋；

c、選擇稀釋度為10^-2-10^-6的稀釋液，依次涂布于固體培養基平板上，在溫度為28℃-37℃，濕度為40％-60％條件下，培養48h-100h；固體培養基的組成為：以質量百分配比計，葡萄糖1％-3％、酵母膏1％-3％、蛋白胨0.1％-0.5％、氯化鈉0.1％-0.5％、瓊脂2.2％，水余量，pH6.0-7.0；

d、挑取c步所培養的單個菌落，劃線涂布于斜面培養基，再按照c步所述條件進行培養；

e、菌種培養：將斜面上的菌苔刮下接種于種子培養基中，在溫度28℃-37℃，搖床轉速為200rpm，條件下培養20h-30h；種子培養基的質量百分配比為葡萄糖1％-3％、酵母粉4％-6％、氯化鈉0.1％-0.5％、磷酸二氫鉀0.05-0.1％，水余量，pH6.0-7.0；

f、發酵方法：將培養后的菌種接種發到發酵培養基中，在溫度28℃-37℃，搖床轉速為200rpm條件下，搖瓶培養48h；發酵培養基的質量百分配比為豆粕粉3％-5％、硫酸銨1％-3％、磷酸二氫鉀0.05-0.1％、七水硫酸亞鐵0.01％-0.07％，水余量，pH6.0-7.0。

3.根據權利要求2所述的高產菌株的篩選方法，其特征在于在b步所說的水溫為40℃-45℃。

4.根據權利要求2所述的高產菌株的篩選方法，其特征在于在b步所說的水溫為50℃-55℃。

5.根據權利要求2所述的高產菌株的篩選方法，其特征在于e步工序中，將斜面培養基上培養好的菌種加入20％甘油保藏管中，-70℃冷凍保藏。

6.根據權利要求2所述的高產菌株的篩選方法，其特征在于在保藏管凍存管要先在4℃進行預凍后再放入液氮內保存。