[發(fā)明專利]制備基因工程菌株的方法及生產(chǎn)藤黃綠菌素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010282431.3
• 申請日: 2010-09-15
• 公開（公告）號: CN101948790A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許煜泉;黃顯清
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/03;C12P17/10;C12R1/38
• 代理公司: 上海交達(dá)專利事務(wù)所 31201
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1.一種基因工程菌株的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，從假單胞菌M18的總基因組DNA中克隆pqsR基因；

步驟二，將pqsR基因亞克隆至攜帶抗生素抗性基因的質(zhì)粒，得重組質(zhì)粒；

步驟三，在pqsR基因中插入抗生素抗性基因，構(gòu)建重組自殺質(zhì)粒；

步驟四，將重組自殺質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，之后與假單胞菌M18野生型菌株雙親雜交；

步驟五，利用含有步驟三所述抗生素的培養(yǎng)基和含有步驟二所述抗生素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，得到能在含步驟三所述抗生素的培養(yǎng)基上生長，且在含步驟二所述抗生素的培養(yǎng)基上不能生長的菌株，即得基因工程菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，步驟二中，所述質(zhì)粒為pEX18Tc、pEX18Gm或pEX18Ap。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，所述質(zhì)粒為pEX18Tc。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，步驟二中，所述抗生素抗性基因?yàn)樗沫h(huán)素抗性基因、慶大霉素抗性基因或氨芐青霉素抗性基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，所述抗生素抗性基因?yàn)閼c大霉素抗性基因。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，步驟三中，所述抗生素抗性基因?yàn)閼c大霉素抗性基因或卡那霉素抗性基因。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，步驟四中，所述大腸桿菌為大腸桿菌SM10。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌株的制備方法，其特征是，步驟五中，所述培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基。

9.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌株生產(chǎn)藤黃綠菌素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，培養(yǎng)基因工程菌株，得發(fā)酵液；

步驟二，提純發(fā)酵液，得藤黃綠菌素。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的生產(chǎn)藤黃綠菌素的方法，其特征是，步驟一中，所述培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體為：該培養(yǎng)基的pH為7.5，1L培養(yǎng)基的組分為：蛋白胨20g，甘油15mL，MgSO₄1.5g，K₂HPO₄0.3g，余量為水。