[發明專利]慶大霉素液相芯片探針的制備方法

有效

• 申請號: 201010281374.7
• 申請日: 2010-09-15
• 公開（公告）號: CN101982773A
• 公開（公告）日: 2011-03-02
• 發明（設計）人: 彭池方;陳偉;匡華;劉麗強;胥傳來
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 北京華夏博通專利事務所 11264
• 代理人: 孫東風

1.一種慶大霉素液相芯片探針的制備方法，其特征在于，該方法為：

(1)取羧基化聚苯乙烯熒光微球均勻分散于pH值為6.0～7.0，含0.05M～0.2M的磷酸鹽緩沖液中，經超聲處理后，再加入過量新鮮配置的50mg/ml氮羥基琥珀酰亞胺磺酸鹽和50mg/ml水溶性碳二亞胺水溶液，均勻混合后，室溫下暗處震蕩孵育15～30min，而后離心移去上清，加入過量0.01％～0.1％的甘氨酸、3-氨基丙酸或4-氨基丁酸溶液，均勻混合后，室溫下暗處孵育15～30min后，離心移去上清，以pH值為7.2～8.0、濃度為0.05M～0.2M的磷酸鹽緩沖溶液洗滌沉淀物，制得初次活化后的熒光微球；

(2)將上述初次活化后的熒光微球加入過量新鮮配制的含50mg/ml氮羥基琥珀酰亞胺磺酸鹽和50mg/ml水溶性碳二亞胺的水溶液中，均勻混合后，室溫下暗處震蕩孵育15～30min，完成對熒光微球的再次活化，其后加入過量的含0.01～1μg/mL慶大霉素的磷酸鹽緩沖溶液，室溫下暗處震蕩孵育1～2h，離心移去上清，以pH值為7.2～8.0、濃度為0.05M～0.2M的磷酸鹽緩沖溶液洗滌沉淀物，制得目標產物慶大霉素液相芯片探針。

2.根據權利要求1所述的慶大霉素液相芯片探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，所述羧基化聚苯乙烯熒光微球是經水洗處理后，再被分散于pH值為6.0～7.0、濃度為0.05M～0.2M的磷酸鹽緩沖溶液中的。

3.根據權利要求1所述的慶大霉素液相芯片探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，所述超聲處理的時間為1～5min，超聲頻率為20KHz。

4.根據權利要求1所述的慶大霉素液相芯片探針的制備方法，其特征在于：所述慶大霉素液相芯片探針是被懸浮于貯存液中保藏的，所述貯存液為pH值為7.2～8.0，濃度為0.05M～0.2M的磷酸緩沖鹽溶液，其含0.1～1.0wt％牛血清白蛋白、0.01～0.05wt％吐溫-20和0.1wt％疊氮鈉。

5.根據權利要求1、2或4所述的慶大霉素液相芯片探針的制備方法，其特征在于：所述磷酸緩沖鹽溶液采用含0.8％wtNaCl的磷酸鹽緩沖液。

6.根據權利要求1所述的慶大霉素液相芯片探針的制備方法，其特征在于：該方法具體為：

(1)取羧基化聚苯乙烯熒光微球經過水洗，離心并去除上清液后，加入pH值為6.0～7.0、濃度為0.05M～0.2M磷酸鹽緩沖溶液中，令該磷酸鹽緩沖溶液中所含熒光微球的濃度為5×10³～2.5×10⁴個/μL，漩渦混合1min，然后超聲1～5min，而后加入過量新鮮配置的50mg/ml氮羥基琥珀酰亞胺磺酸鹽水溶液和50mg/ml水溶性碳二亞胺水溶液，漩渦混合10s后，形成混合反應溶液，而后將該混合反應溶液于室溫下暗處震蕩孵育20min，孵育完成后，離心移去上清，將沉淀分散于濃度為0.01wt％～0.1wt％的甘氨酸、3-氨基丙酸或4-氨基丁酸溶液中，并于室溫下暗處再次孵育15～30min，而后離心移去上清，沉淀以pH值為7.2～8.0、濃度為0.05M～0.2M的磷酸鹽緩沖溶液洗滌兩次，制得初次活化后的熒光微球；

(2)將上述初次活化后的熒光微球加入過量新鮮配制的含50mg/ml氮羥基琥珀酰亞胺磺酸鹽和50mg/ml水溶性碳二亞胺的水溶液中，漩渦混合10s后，室溫下暗處震蕩孵育20min，完成對熒光微球的再次活化，其后加入過量的含0.01～1μg/mL慶大霉素的磷酸鹽緩沖溶液，室溫下暗處震蕩孵育1～2h，離心移去上清，以pH值為7.2～8.0、濃度為0.05M～0.2M的磷酸鹽緩沖溶液洗滌沉淀物兩次，制得目標產物慶大霉素液相芯片探針，該該目標產物懸浮于貯存液中保存，所述貯存液采用pH值為7.2～8.0，濃度為0.05M～0.2M的磷酸緩沖鹽溶液，其含0.1～1.0wt％牛血清白蛋白、0.01～0.05wt％吐溫-20和0.05～0.2wt％疊氮鈉。