[發明專利]一種用于增強腫瘤化療藥物化療效果的表達質粒佐劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201010280657.X
• 申請日: 2010-09-14
• 公開（公告）號: CN101954077A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 孫樹漢;商京麗;魏偉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K48/00;A61K31/513;C12N15/113;C12N15/867;A61P35/00
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，具體涉及一種用于增強化療藥物化療效果的PLKO-anti-miR-23a表達質粒佐劑及其制備方法。

背景技術

5-氟尿嘧啶(5-FU)廣泛應用于消化道惡性腫瘤的化學治療，由于它療效確切，一直處于其他化療藥無法替代的地位，但一些病例對該藥物為主的化療并不敏感。5-FU是治療大腸癌，胃癌，膽管癌常用的藥物，單藥治療的有效率僅20％左右。化療藥的聯合使用(如：5-FU+長春新堿+司莫司汀)，使晚期大腸癌的化療有效率明顯提高，患者中位生存時間明顯延長。盡管如此，大腸癌化療中原發和獲得性耐藥現象很普遍。基因遺傳多態性，使患者對化療敏感性存在個體化差異。如何選擇合適的化療方案和選擇增強化療效果的佐劑使患者從治療中受益，非常重要。

細胞凋亡是化療藥物發揮作用的重要途徑。細胞有增殖、分化和凋亡三種特性，在正常情況下，三者相互協調，保持平衡。腫瘤組織除了具有增殖活性以外，腫瘤細胞凋亡率減少，將使腫瘤細胞凈生長率提高，預后則更差。根據細胞凋亡發生的過程分為兩條途徑：一條是死亡受體途徑，即通過胞外信號激活細胞內的凋亡酶caspase；一條是線粒體途徑，即通過線粒體釋放凋亡蛋白酶激活因子激活caspases。這些活化的caspase蛋白可將細胞內的重要蛋白降解，引起細胞凋亡。線粒體在細胞凋亡發生機制中起關鍵作用，它不僅可以自身釋放細胞色素C等物質介導凋亡，還可以和其他凋亡誘導因子共同作用而改變自身的活動狀態，從而更好的調節細胞凋亡。APAF-1(凋亡肽誘導因子1)作為調節蛋白主要參與線粒體途徑的信號轉導。APAF-1廣泛分布于人腦、心、肝、脾、肺、胰、腎、胸腺、小腸、結腸、骨骼肌、卵巢、睪丸、外周血白細胞等多種組織和細胞內。在化療藥物作用下，線粒體功能障礙導致細胞色素C釋放；釋放到細胞漿的細胞色素C在dATP存在的條件下能與APAF-1結合，使其形成多聚體，并促使caspase-9與其結合形成凋亡體，caspase-9隨即被激活；被激活的caspase-9能激活其它的caspase，如caspase-3等；caspase-3又激活DNA斷裂因子，導致靜息狀態的核酸內切酶活化，最終引起DNA斷裂，引起細胞凋亡。

microRNA(miRNA)是一類長度約21～25堿基的非編碼蛋白質單鏈小分子RNA，廣泛存在于多細胞生物和病毒體內，主要通過核酸序列互補匹配結合到特定的靶mRNA上，抑制靶mRNA翻譯過程或降解靶mRNA，是一種起負調控作用的分子。目前越來越多的研究顯示，miRNA廣泛參與了生物體多種生理過程，且相關研究報道也表明其表達及功能失調可能影響腫瘤發生、發展和化療等多種病理現象。目前，對于miRNA干預腫瘤化療的報道逐漸增多。例如：FANYIN?MENG等人證實：在膽管癌的化療中抑制miR-21和miR-200b的表達可以增強化療藥物的敏感性(FANYIN?MENG，ROGERHENSON，MOLLY?LANG，HANIA?WEHBE，SHAILMAHESHWARI，JOSHUA?T.MENDELL，JINMAI?JIANG，THOMAS?D.SCHMITTGEN，and?TUSHAR?PATEL?GASTROENTEROLOGY2006；130：2113-2129)。Chan?JA，Krichevsky?AM，等研究者發現miR-21可以通過干擾凋亡相關基因的表達增強神經膠質瘤的耐藥性(Chan?JA，Krichevsky?AM，Kosik?KS.MicroRNA-21is?an?antiapoptotic?factor?in?humanglioblastoma?cells.Cancer?Res.2005Jul?15；65(14)：6029-33.)。