[發明專利]一種用于增強腫瘤化療藥物化療效果的表達質粒佐劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201010280657.X
• 申請日: 2010-09-14
• 公開（公告）號: CN101954077A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 孫樹漢;商京麗;魏偉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K48/00;A61K31/513;C12N15/113;C12N15/867;A61P35/00
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

1.一種用于增強腫瘤化療藥物化療效果的質粒佐劑，它以慢病毒載體質粒PLKO.1為基本骨架，含有頸環結構的如SEQ?ID?NO：1所示的正義鏈序列和如SEQ?ID?NO：2所示的反義鏈序列的質粒。

2.根據權利要求1所述的用于增強腫瘤化療藥物化療效果的質粒佐劑，其中所述的腫瘤化療藥物是5-氟尿嘧啶或在腫瘤化療中可以引起miR-23a表達增加的化療藥物。

3.一種如權利要求1或2所述的用于增強腫瘤化療藥物化療效果的質粒佐劑的制備方法，具體步驟如下：

具有頸環結構的表達miR-23a抑制劑序列：

正義鏈：5′CCGGTATCACATTGCCAGGGATTTCCCTCGAGGGAAATCCCTGGCAATGTGATTTTTTG?3′(SEQ?ID?NO：1)

反義鏈：5′AATTCAAAAAATCACATTGCCAGGGATTTCCCTCGAGGGAAATCCCTGGCAATGTGAT?A?3′(SEQ?ID?NO：2)

在序列的兩端加上能與載體末端匹配結合酶切位點的粘性末端，將帶有頸環結構的序列經人工合成后，將核苷酸序列重懸于雙蒸水中，濃度為1ug/ul。將此管核苷酸序列退火合成雙聯。

退火體系為：

-5ul?of?Sense?oligo

-5ul?of?Antisense?oligo

-5ul?of?10x?NEB?buffer?2

-35ul?ddH2O

共50ul體系，于95℃水浴中孵育4分鐘，在盛有1500ml水的燒杯中于70℃孵育10分鐘，然后自然降至室溫，形成雙鏈結構。將慢病毒載體質粒PLKO.1經酶切位點AgeI和EcoRI酶切后，將雙鏈寡核苷酸序列克隆入酶切后的PLKO.1載體中。