[發明專利]模擬折疊酶功能的小分子化合物N-烷基酰胱胺、制備方法及用于輔助蛋白質氧化復性的方法

有效

• 申請號: 201010276124.4
• 申請日: 2010-09-08
• 公開（公告）號: CN101921216A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 孫彥;王國珍;史清洪;董曉燕
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C07C323/41
• 分類號: C07C323/41;C07C319/22;C07K1/00
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 王麗

1.一種模擬折疊酶功能的小分子化合物N-烷基酰胱胺，其特征在于，N-烷基酰胱胺是胱胺分子中一端的氨基，通過酰胺化反應與脂肪酸的羧基偶聯而形成，N-烷基酰胱胺結構形式表達如下：

其中：R為含有4～7個碳原子的烷基鏈；

上述的脂肪酸選自戊酸、己酸、庚酸和辛酸。

2.一種N-烷基酰胱胺的制備方法，其特征在于：

1)將胱胺二鹽酸鹽用去離子水溶解，得到0.05-1mol/L胱胺溶液后，加入含有5-8個碳原子的脂肪酸，脂肪酸的摩爾濃度為胱胺摩爾濃度的0.02-0.5倍，混合后，用NaOH將其pH調至5.5-6.5；

2)向上述制得的液體中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽固體粉末，使固體粉末摩爾濃度為脂肪酸摩爾濃度的5-100倍；

3)將上述反應體系置于15-30℃恒溫水浴搖床，反應3-6小時，得到N-烷基酰胱胺粗產物；

4)將粗產物首先用0.45μm的水系微孔濾膜過濾，然后用C18反相色譜柱進行分離，收集的組分經冷凍干燥得到N-烷基酰胱胺。

3.用N-烷基酰胱胺輔助蛋白質氧化復性的方法，其特征在于：經含DTT的變性液還原變性的蛋白質或包含體溶液，用不含DTT的變性液稀釋5-25倍后稀釋于或直接稀釋于由20-100mmol/L三羥甲基氨基甲烷、0-3.0mmol/L乙二胺四乙酸四鈉、0-2mol/L尿素或0-1mol/L鹽酸胍及N-烷基酰胱胺組成的pH為7.5-9.0的復性液中，使得稀釋后溶液中N-烷基酰胱胺濃度為DTT摩爾濃度的0.25-1.3倍。

4.如權利要求3所述的氧化復性的方法，其特征在于所述的N-烷基酰胱胺，當其為N-辛基酰胱胺時，其摩爾濃度為體系中變性還原蛋白質摩爾濃度的40倍及以下。