[發(fā)明專(zhuān)利]嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010276051.9
• 申請(qǐng)日: 2010-09-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101948853A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹以誠(chéng);周毅;杜正平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州華峰生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/54
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/54;C12N15/63;C12N9/12;C12N15/10;C07K19/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

1.一種嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶的基因，其特征在于，所述的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶基因的核苷酸編碼序列如SEQ?ID?NO?1所示。

2.一種含有權(quán)利要求1所述的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶的基因的質(zhì)粒pMal-c5x/bst。

3.一種嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶，其特征在于，所述的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO?2所示。

4.如權(quán)利要求3所述的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的應(yīng)用。

5.一種融合蛋白，其具有權(quán)利要求3所述的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶，所述的融合蛋白還具有麥芽糖結(jié)合蛋白。

6.如權(quán)利要求5所述的融合蛋白在嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶純化的應(yīng)用。

7.一種嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶的制備方法，其特征在于，所述的純化方法包括如下步驟：

(1)擴(kuò)增如SEQ?ID?NO?1所示的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶基因的核苷酸編碼序列；

(2)將步驟(1)得到的核苷酸編碼序列克隆到pMal-c5x表達(dá)載體中，得到重組質(zhì)粒pMal-c5x/bst；

(3)在大腸桿菌中表達(dá)重組質(zhì)粒pMal-c5x/bst，獲得麥芽糖結(jié)合蛋白和嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段的融合蛋白；

(4)采用直鏈淀粉親和層析純化步驟(3)得到的融合蛋白；

(5)將純化后的融合蛋白進(jìn)行蛋白酶酶解，得到如SEQ?ID?NO?2所示的嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶。