[發(fā)明專利]甜(辣)椒未成熟小孢子直接誘導(dǎo)萌發(fā)成植株的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010274159.4
• 申請日: 2010-09-07
• 公開（公告）號: CN101946713A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李春玲;鄧曉梅;朱至清;佟曦然
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市海淀區(qū)植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京國浩君伍知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11346
• 代理人: 朱登河

1.甜(辣)椒未成熟小孢子直接誘導(dǎo)萌發(fā)成植株的方法，包括下述步驟：

(1)、無菌花藥的獲得：對小孢子處于單核靠邊期或雙核期的花蕾進(jìn)行表面消毒，剝離花藥；

(2)、無菌花藥的預(yù)培養(yǎng)：將步驟(1)中的無菌花藥置于改良的固體R培養(yǎng)基中，4℃低溫處理2～15天；

(3)、小孢子的收集：取步驟(2)中預(yù)培養(yǎng)后的花藥，置于改良的液體R培養(yǎng)基中，擠壓使小孢子游離，300目濾網(wǎng)過濾，離心收集小孢子；

(4)、小孢子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：將步驟(3)獲得的小孢子置于含麥芽糖或蔗糖3～15％、2，4-D濃度為0.1～0.5mg/L，KT濃度為0.5～1mg/L的液體R培養(yǎng)基中，在24～28℃下，黑暗或光照培養(yǎng)；

(5)、植株的獲得：當(dāng)步驟(4)中的小孢子經(jīng)誘導(dǎo)形成胚狀體后，分別按照下述(i)、(ii)、(iii)三種不同路徑進(jìn)行培養(yǎng)，得到正常植株；

(i)小孢子經(jīng)誘導(dǎo)后形成的胚狀體為子葉型胚時(shí)，轉(zhuǎn)至含有濃度為1～3％蔗糖的1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到正常植株；

(ii)小孢子經(jīng)誘導(dǎo)后形成的胚狀體為畸形胚狀體時(shí)，可用改良液體R培養(yǎng)基與它的固體形式1∶1混合包埋胚狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)行培養(yǎng)，得到正常植株，所述的畸形胚狀體為畸形心型胚或畸形魚雷型胚；

(iii)小孢子經(jīng)誘導(dǎo)后形成不正常的小植株時(shí)，將植株轉(zhuǎn)接至含有濃度為1％-3％的蔗糖，BA?2毫克/毫升和NAA?0.2毫克/毫升的MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到正常植株，所述的不正常的小植株為沒有完整的生長點(diǎn)或是生長畸形的再生植株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中對花蕾進(jìn)行表面消毒的步驟為用70％酒精浸泡0.5～1分鐘，1～2‰氯化汞浸泡8～15分鐘，無菌水沖洗3～5次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中的改良的固體R培養(yǎng)基中還含有濃度為3％的蔗糖或麥芽糖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)中改良的液體R培養(yǎng)基中還含有濃度為3～15％的蔗糖或麥芽糖。