[發(fā)明專利]一種羊水來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的分離純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010273878.4
• 申請日: 2010-09-07
• 公開（公告）號: CN101948798A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃荷鳳;徐晨明;陳松長;黃祎婷;王金福;胡文勝
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種羊水來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的分離純化方法，所述方法包括如下順序步驟：

(1)取產(chǎn)前診斷羊水培養(yǎng)物的廢棄上清，以500～1000ce1l/cm²密度種植到培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)至出現(xiàn)梭形類成纖維細(xì)胞樣的間充質(zhì)干細(xì)胞集落，去除非貼壁細(xì)胞，加入細(xì)胞培養(yǎng)液I繼續(xù)培養(yǎng)4～7天，每2～3天換新鮮培養(yǎng)液；所述細(xì)胞培養(yǎng)基I終濃度組成如下：

15％FBS+4～8ng/ml?bFGF+100U/ml青霉素+100U/ml鏈霉素，溶劑為低糖DMEM培養(yǎng)液；

(2)取步驟(1)培養(yǎng)獲得的細(xì)胞以5～10cell/cm²密度種植于培養(yǎng)皿上，加入細(xì)胞培養(yǎng)液II培養(yǎng)直至單克隆細(xì)胞長出，即得所述羊水來源的間充質(zhì)干細(xì)胞；所述細(xì)胞培養(yǎng)液II終濃度組成如下：20％FBS+4～8ng/ml?bFGF+100U/ml青霉素+100U/ml鏈霉素，溶劑為低糖DMEM培養(yǎng)液。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述廢棄上清由如下方法獲得：取用于產(chǎn)前診斷的中期無菌羊水樣本，1500rpm離心10min，取上清加等體積細(xì)胞培養(yǎng)液II，重懸細(xì)胞沉淀，移至T₂₅培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)7天后，收獲貼壁細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷，收集廢棄上清備用；所述細(xì)胞培養(yǎng)液II終濃度組成如下：20％FBS+4～8ng/ml?bFGF+100U/ml青霉素+100U/ml鏈霉素，溶劑為低糖DMEM培養(yǎng)液。