[發明專利]檢測復方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法

有效

• 申請號: 201010273815.9
• 申請日: 2010-09-02
• 公開（公告）號: CN101961405A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 蔡春玲;康志英;連林生;李小妹;王德秀;黃潔文
• 申請（專利權）人: 廣州市香雪制藥股份有限公司
• 主分類號: A61K36/74
• 分類號: A61K36/74;A61K9/20;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36;A61P9/12
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技術領域

本發明屬于醫藥領域中成藥有效成分含量的測定方法，具體涉及復方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的測定方法。

背景技術

復方杜仲片由杜仲、益母草、鉤藤、夏枯草、黃芩制成，主要用于腎虛肝旺之高血壓癥。該產品具有良好的降高血壓的作用，在臨床應用較廣。該產品收載于中國衛生部藥品標準中藥成方制劑第6冊第117頁WS3-B-1185-92。而標準中僅有簡單的顯微鑒別和顯色反應對產品質量進行控制。這類鑒別方法粗糙，無專屬性。無法有效控制產品質量。

復方杜仲片處方中的君藥為杜仲，是我國的名貴藥材，屬于國家二級保護植物，具有補肝腎、強筋骨、降血壓的作用，而杜仲中主要降血壓的成分即為松脂醇二葡萄糖苷(Pinoresind?Diglucoside，簡稱PDG)，因此對松脂醇二葡萄糖苷進行含量測定，更能體現復方杜仲片質量的優劣。

關于杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量測定方法文獻報道較少，王月茹等在文獻“HPLC測定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量”，《現代中醫藥》，2009年11月第29卷第6期78～79頁中報道了測定杜仲藥材中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。但是，復方杜仲片的制備工藝是由多種藥材采用水提取工藝制得，因此片劑中含有的成分復雜，還含有蛋白質、多糖類等等成分，如直接用水、甲醇等極性溶劑提取，過濾困難，從而影響了該成分的提取分離和測定數據的正確性。按該文獻的方法松脂醇二葡萄糖苷是無法從復方杜仲片中分離出來，在高效液相色譜圖中也檢測不到相應的成分。為此，必需尋找能測定復方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的具體可操作和生產上可應用的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測復方杜仲片中松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。

本發明所采用的技術方案是這樣實現的：用高效液相色譜法測定，每片含松脂醇二葡萄糖苷不得少于0.05mg，每片基片重量為0.35g，松脂醇二葡萄糖苷的分子式為C₃₂H₄₂O₁₆，具體操作按以下進行：

色譜條件??以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑；以甲醇為流動相A，以水為流動相B組成的洗脫液進行梯度洗脫；檢測波長：230nm；流速：1ml/min；理論板數按松脂醇二葡萄糖苷峰計算應不低于2000；所說的梯度洗脫優選如下程序進行：

對照品溶液的制備??精密稱取松脂醇二葡萄糖苷加入體積百分濃度為25％的甲醇水溶液制成每1ml中含松脂醇二葡萄糖苷0.035mg的溶液，即得；

供試品溶液的制備??取復方杜仲片，除去包衣，研細，精密稱定細粉1g，置三角瓶中，加入體積百分濃度為60％的甲醇水溶液80ml，超聲提取30分鐘，濾過，并用甲醇洗滌殘渣，濾液加60ml正己烷萃取1次，取下層溶液減壓濃縮至約5ml，再加無水乙醇30ml超聲2分鐘，濾取溶液，濾液減壓濃縮至約0.5ml，用75％乙醇溶液7ml使溶解，通過100～200目的硅膠柱，用二氯甲烷40ml洗脫，棄去洗脫液，再用乙酸乙酯∶甲醇體積比為70∶30的混合溶液120ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加體積百分濃度為30％的甲醇水溶液使溶解并定容至10ml，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

測定??分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ul，注入高效液相色譜儀，測定，按外標法計算即得。

松脂醇二葡萄糖苷為水溶性成分，可以采用水、甲醇、乙醇等溶劑提取。但由于復方杜仲片的制備工藝是由多種藥材采用水提取工藝制得，因此片劑中含有的成分復雜，還含有蛋白質、多糖類等等成分，如直接用水、甲醇等極性溶劑提取，過濾困難，從而影響了該成分的提取分離和測定數據的正確性。為此，對供試品溶液的制備是關鍵技術。

供試品溶液的制備歸納采用如下方法予以比較：

采用同一批號復方杜仲片制備供試品溶液，并采用同一條件進行高效液相色譜檢測：以碳十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑；以甲醇∶水的體積比為20∶80組成；檢測波長：230nm；流速：1ml/min。

具體如下表所示：

從上表可知，只有采用甲醇提取才可能檢測出松脂醇二葡萄糖苷，而提取后采用什么分離方法才能保證松脂醇二葡萄糖苷的譜峰分離效果好、純度高、測定的準確度高也是該技術的關鍵，發明人通過反復試驗確定了供試品的制備方法。

本發明的色譜條件的確定