[發(fā)明專利]一種根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010273537.7
• 申請日: 2010-09-07
• 公開（公告）號: CN101942035A
• 公開（公告）日: 2011-01-12
• 發(fā)明（設計）人: 鄭春陽;魏國祥;張巍
• 申請（專利權）人: 天津強微特生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12P19/04;C12R1/41
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1.一種根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征是：由下述步驟完成：

1)稀釋預處理

在發(fā)酵液中加入1～10倍體積的蒸餾水，采用稀堿調溶液pH至8～10，開啟攪拌并加熱至60～80℃，并持續(xù)0.2～5小時；

2)絮凝除蛋白

在經(jīng)稀釋預處理的根瘤菌發(fā)酵液中加入絮凝劑，然后用稀酸調整溶液pH至4～6，攪拌，當有大塊絮狀物出現(xiàn)時停止，采用10000g離心30～120min，收集上清液；

3)離子交換

上清液采用0.5～2BV速度上陰離子交換劑(Cl^-型)柱，采用酚-硫酸法檢測多糖，漏吸停止上柱，采用蒸餾水沖洗至無色為止，然后用2mol/L濃度的NaCl溶液洗脫，收集多糖洗脫峰；

4)濃縮除鹽

收集的含多糖離子交換液，采取1000～100000Da分子量的濾膜，控制過濾壓力0.3～2.8Mpa，濃縮至多糖質量濃度至15～40％時停止；

5)酒精醇沉

在多糖濃縮液中，緩慢加入2～4倍體積質量濃度≥95％的酒精，并采用稀酸調至pH4～7，然后降溫至-20～4℃，放置4～24小時醇沉，然后采用10000g離心30min，收集多糖沉淀物；

6)真空干燥

多糖沉淀置于40～70℃真空干燥箱內，控制相對真空度≥0.085Mpa，進行干燥，獲得成品。

2.根據(jù)權利要求1所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述多糖是由植物、海澡或微生物所產生的酸性多糖。

3.根據(jù)權利要求2所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述多糖優(yōu)選自微生物產生的酸性多糖。

4.根據(jù)權利要求1所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述絮凝除蛋白步驟中，所述絮凝劑為食品級，選自聚丙烯酸、聚丙烯酸鈉、殼聚糖、聚丙烯酰銨中的任意一種。

5.根據(jù)權利要求1所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述絮凝除蛋白步驟中，菌體分離方法采用離心分離或板框分離。

6.根據(jù)權利要求1所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述離子交換步驟中，所述陰離子交換劑采用DEAE-纖維素、DEAE-Sepharose、強或弱堿性陰離子交換聚丙乙烯系列樹脂。

7.根據(jù)權利要求6所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述離子交換步驟中，所述陰離子交換劑優(yōu)選為DEAE-纖維素。

8.根據(jù)權利要求1所述的根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征在于：所述在真空干燥步驟中，所述干燥的方式為真空干燥、噴霧干燥、滾筒干燥或流化床干燥方式。