[發明專利]一種楓楊高效組織培養繁殖方法

無效

• 申請號: 201010271552.8
• 申請日: 2010-09-01
• 公開（公告）號: CN101999318A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發明（設計）人: 陳錦懷;李文驊;張榮根;蔣澤平;韓杰鋒;黃源;文必秀;蔣鵬;陳泓宇;王煦輝
• 申請（專利權）人: 揚中市林蠶技術指導站;江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林;嚴志平

1.一種楓楊高效組織培養繁殖方法，包括以下步驟：

(1)選材及消毒處理：采用經選育的楓楊優良單株根部萌發的10～20厘米長萌條莖段為外植體，然后將選取的外植體剪切成2～4cm長的小段，經70％酒精消毒45秒，再用濃度為0.1％的升汞溶液消毒8～10分鐘，最后用無菌水沖洗3～5次；

(2)試管芽苗培養：在超凈的工作臺上及無菌條件下，將步驟(1)中消毒后的外植體剪去接觸消毒液的傷口，留1～2cm帶芽莖段接種在經消毒的含有啟動培養基的培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，其中光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為16小時，溫度為22～25℃，濕度為50％～65％，培養45天，分化長成試管芽苗；

(3)增殖培養：將從步驟(2)中長成的試管芽苗，剪切帶有1～2個腋芽的節段或頂芽后，在超凈的工作臺上及無菌條件下，轉接于經消毒的含有增殖培養基的培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，在光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為16小時，溫度為22～25℃，濕度為50％～65％的條件下，對芽苗進行增殖培養，使其不斷增殖，直至達到所需要的繁殖生產規模；

(4)壯苗培養：將步驟(3)中增殖后的試管芽苗，剪切帶有1～2個腋芽的節段或頂芽后，在超凈的工作臺上及無菌條件下，接種于經消毒的含有壯苗培養基的培養瓶中，在光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為16小時，溫度為22～25℃，濕度為50％～65％的條件下，進行壯苗培養，25天后進入下一步驟；

(5)生根培養：將步驟(4)中經過壯苗培養后的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3～4片葉片，在超凈的工作臺上及無菌條件下，接種于經消毒的含有生根處理產生根原基培養基的培養瓶中，在光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為16小時，溫度為22～25℃，濕度為50％～65％的條件下，進行生根培養6～10天；

(6)移栽、成活：將步驟(5)中經生根培養的帶有根原基的無根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黃心土的基質中，其中泥炭與黃心土的體積比為：3∶2，然后澆透水，保持溫度25～30℃，相對濕度85％以上，先遮光培養10天，后逐漸見光，20天后生根成活，在培養40～45天后，進行全光照；

所述的啟動培養基為：每升基本培養基+0.05～0.2mg?N-苯基-N′-(2-氯-4-吡啶基)脲+0.75～1.0mg?6-芐基嘌呤+0.02～0.1mg吲哚丁酸；

所述的增殖培養基為：每升基本培養基+0.2～0.5mg噻苯隆+1.2～2.0mg?6-芐基嘌呤+0.04～0.1mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的壯苗培養基為：每升基本培養基+0.1～0.4mg噻苯隆+1.0～1.5mg6-芐基嘌呤+0.08～0.2mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的生根處理產生根原基培養基為：每升基本培養基+0.3～0.6mg?α-萘乙酸+0.5～0.8mg吲哚丁酸+2000～3000mg活性炭。

2.根據權利要求1所述的一種楓楊高效組織培養繁殖方法，其特征在于，所述的基本培養基包括常量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分。

3.根據權利要求2所述的一種楓楊高效組織培養繁殖方法，其特征在于，所述的常量元素的組分和其對應的濃度如下：

硝酸鉀??????950～1900mg/L；

硝酸銨??????412.5～825mg/L；

磷酸二氫鉀??170～255mg/L；

硫酸鎂??????370～462.5mg/L；

氯化鈣??????440～550mg/L。

4.根據權利要求2所述的一種楓楊高效組織培養繁殖方法，其特征在于，所述的微量元素的組分和其對應的濃度如下：

碘化鉀??????0.83mg/L；

硼酸????????6.2mg/L；

硫酸錳??????22.3mg/L；

硫酸鋅??????8.6mg/L；

鉬酸鈉??????0.25mg/L；

硫酸銅????0.025mg/L；

氯化鈷????0.025mg/L。