[發明專利]大豆非組織培養植株再生方法及其應用

無效

• 申請號: 201010270559.8
• 申請日: 2010-09-01
• 公開（公告）號: CN101946623A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 單志慧;沙愛華;陳海峰;陳李淼;郝青南;孫佃臣;田星星;周新安
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種大豆非組織培養植株再生方法及其應用。

背景技術

在大豆抗病、蟲育種時，需要對收集的品種資源、雜交后代、轉基因后代進行病、蟲接種鑒定，切取植株某部分組織或器官進行生理、生化分析，同時又要求被檢測的植株能夠正常的繁衍后代。這類材料的共同特點是個體數量少，每個個體遺傳背景均不相同，而且在現實中難以重復獲得。由于病、蟲接種以及切取植株部分組織或器官對植株造成的多為不可恢復的破壞性損傷，被檢測的植株無法繁衍后代。通常對這類材料的鑒定或生理生化指標檢測需要等到它們的后代遺傳穩定后才能進行，但這往往需要3-5代的繁殖時間，而且必保留每個后代的衍生株系，如果按每個植株每代結籽10粒來計算的話，那么經過3代以后，最初的1粒種子會有1000個后代植株，如果在此時進行病、蟲接種鑒定或生理生化分析，無疑大大增加實驗規模，同時耗費巨大的人力、物力，而大規模接種病、蟲也是非常不現實的行為。植物的另一種繁殖途徑是通過無性繁殖即組織培養的方法，但組織培養需要嚴格的無菌條件和培養條件，不同品種的再生都具有很強的基因型依賴性，而且培養周期長于植物正常的生長周期。因此，開發一種能在早世代進行病、蟲害接種鑒定且不影響植株正常繁殖的方法已成為提高育種效率的迫切需要。

發明內容

本發明的目的是提供一種大豆非組織培養植株再生方法及其應用。

本發明提供的方法，包括如下步驟：

將植物苗的頂芽去除，再沿子葉接縫處平分縱切下胚軸，將1個植物苗一分為二，分別作為外植體，每個外植體在子葉節處均具有1片子葉和1個腋芽；將外植體進行培養，得到植物再生植株；

所述植物苗具有如下結構：在子葉節處具有2片子葉及2個腋芽，子葉節之上部分為頂芽和上胚軸，子葉節之下部分為根和下胚軸。

所述上胚軸連接所述頂芽和所述子葉節，所述下胚軸連接所述根和所述子葉節。

所述將頂芽去除的位置是從所述子葉節處除去；

在所述培養植物再生植株的方法中，所述將植物苗的頂芽去除和所述再沿子葉接縫處平分縱切下胚軸的步驟間還包括如下步驟：將所述植物苗的根去除的步驟，所述植物苗的根去除位置是自所述子葉節處下數2cm-3cm處；所述將根去除的位置具體為自子葉節處下數2cm、2.5cm或3cm處。

所述將外植體進行培養的方法包括將外植體的子葉節以下部分均埋入基質中，再進行培養，得到再生植株幼苗；

所述基質為無菌蛭石；

所述培養的條件包括溫度為24℃-26℃，光照條件為每天14小時-18小時光照/10小時-6小時黑暗，光照強度為100μmol/m²/s-140μmol/m²/s，相對濕度為60％-90％，所述溫度具體為24℃、25℃或26℃，所述光照條件具體為每天14小時光照/10小時黑暗、16小時光照/8小時黑暗或18小時光照/6小時黑暗，所述光照強度具體為100μmol/m²/s、120μmol/m²/s或140μmol/m²/s，所述相對濕度具體為60％、80％或90％。所述培養的時間為20天-30天，所述培養的時間具體為20天、25天或30天。

所述植物為雙子葉植物，所述雙子葉植物優選為豆科植物，尤其優選為大豆。

所述的方法在植物的遺傳育種鑒定中的應用也是本發明保護的范圍。

所述應用中，所述遺傳育種鑒定為抗病性鑒定。

所述病為大豆花葉病毒病或者大豆銹病。

所述大豆花葉病毒病為的病原菌為馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)、馬鈴薯Y病毒屬(potyvirus)、大豆花葉病毒種soybean?mosaic?virus。所述大豆銹病的病原菌為擔子菌綱(basidomycetes)、銹菌目(Urediales)、柵銹科(Malampsoraceae)、層銹屬(Phakopsora)、大豆銹菌種(Phakopsora?pachyrhizi?Sydow)。

本發明的實驗證明，本發明的方法具有如下優點：

1)條件簡單：培養過程中無需無菌條件，一般實驗室均可進行；

2)培養過程不需任何培養基：反應過程中僅需提供足夠的水和光源，大豆子葉具有足夠的營養滿足腋芽發育成一個新的植株，省去了研制培養基配方的過程；

3)外植體制備工藝簡單，便于掌握：外植體制備時對幼苗要求不是特別嚴格，7-10天的幼苗均可采用，外植體制備時，僅需要去掉頂芽，縱切子葉節即可，一個普通工人稍加培訓即可掌握；