[發明專利]恩諾沙星殘留的時間分辨免疫分析檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201010269007.5
• 申請日: 2010-08-31
• 公開（公告）號: CN102135534A
• 公開（公告）日: 2011-07-27
• 發明（設計）人: 孫遠明;雷紅濤;楊金易;沈玉棟;王弘;肖治理
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N1/28;G01N21/75;G01J1/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種檢測恩諾沙星殘留的時間分辨免疫分析檢測試劑盒，其特征在于包括包被了恩諾沙星抗原的酶標板、恩諾沙星抗體、鑭系元素標記羊抗兔或羊抗鼠抗體；所述鑭系元素為Eu³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺或Sm³⁺。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述恩諾沙星抗原是將恩諾沙星和載體蛋白偶聯得到；所述恩諾沙星抗體包括單克隆抗體、兔多克隆抗體或基因工程抗體。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于還包括恩諾沙星標準溶液、增強液、濃縮洗滌液和樣品稀釋濃縮液。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述恩諾沙星標準溶液是以濃度為1000μg/L的恩諾沙星配成的濃度梯度為0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1μg/L的恩諾沙星標準品溶液。

5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述增強液包括β-二酮體、三辛基氧化磷(TOPO)、Triton?X-100、冰醋酸和pH值為2.0～3.2的鄰苯二甲酸氫鉀。

6.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述濃縮洗液包括0.5～1.5％吐溫20的磷酸鹽緩沖液；所述濃縮稀釋液為pH值7.4～8.0、0.1～0.25mol/L的磷酸鹽緩沖液。

7.根據權利要求1所述的時間分辨免疫分析試劑盒，其特征在于所述酶標板是96/40孔酶標板，且空白板的熒光值低于1000。

8.一種恩諾沙星的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)樣品前處理；

(2)用權利要求1～7任一項所述的試劑盒進行檢測；

(3)結果處理與分析。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于所述樣品前處理為：

(1)蜂蜜：

稱取樣品3g，加入3mL蒸餾水，振蕩均勻，加入6mL乙酸乙酯，振蕩15min，5000r/min離心10min，吸取上層2mL旋轉蒸干，加入1mL正己烷溶解干燥物，再加入1mL?PBS溶液復溶，除去上層正己烷相，下層清夜50μL待測；

或(2)禽蛋：

稱取樣品3g，加入乙腈-水溶液6mL，振蕩10min，5000r/min離心10min，取上層2mL，加入2mL乙酸乙酯，振蕩15min，5000r/min離心10min，吸取全部上層溶液，旋轉蒸干，加入1mL正己烷溶解干燥物，再加入1mL?PBS溶液復溶，除去上層正己烷相，下層清夜50μL待測；

或(3)組織：

所述組織為肌肉、肝臟或腎臟；稱取樣品3g，加入PBS?3mL，振蕩10min；5000r/min離心10min，取上層2mL加入等量正己烷，輕輕混勻，5000r/min離心10min，取下層清夜50μL待測。

10.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將試劑盒從冷藏環境中取出，置于20～24℃環境中平衡不少于30min，將酶標板條固定，做平行實驗，按順序編號；

(2)在標準品孔加入50μL標準溶液，樣品孔加入50μL待測樣品，然后每孔加入50μL恩諾沙星抗體工作液，混勻；振蕩反應；

(3)步驟(2)所述振蕩反應后洗板，拍干，每孔加入100μL銪標二抗工作液，振蕩反應；

(4)步驟(3)所述振蕩反應后洗板，拍干，每孔加入200μL增強液，混勻，避光室溫輕拍振蕩；

(5)用時間分辨免疫分析檢測儀測定各孔熒光值；

(6)根據標準溶液熒光值與濃度半對數做標準曲線，根據標準曲線與樣品溶液熒光值計算樣品濃度。