[發明專利]利用懸浮培養葡萄細胞生產13C標記反式白藜蘆醇的方法

無效

• 申請號: 201010268857.3
• 申請日: 2010-09-01
• 公開（公告）號: CN102382862A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 張衛;岳向國
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明涉及植物細胞培養技術，具體地說是一種通過添加¹³C標記前體生產¹³C標記反式白藜蘆醇的方法。

背景技術

反式白藜蘆醇(trans-resveratrol)是一種類黃酮類多酚化合物，化學名為3，5，4’-三羥基-反-二苯代乙烯)。天然的白藜蘆醇存在于葡萄皮、花生及傳統中藥虎杖等植物體中，它屬于一種植物抗毒素，在惡劣環境或是植物受到霉菌感染時產生(M.Jang，L.Cai，G.Udeani，K.Slowing，C.Thomas，C.Beecher，H.Fong，N.Farnsworth，A.Kinghorn，R.Mehta，Cancer?chemopreventive?activity?of?resveratrol，anatural?product?derived?from?grapes，Science，1997，275：218)。大量研究表明，反式白藜蘆醇能夠阻止低密度脂蛋白的氧化，具有抗菌、抗脂質過氧化、防治心臟病、抗癌、抗血小板凝集與血管松弛、降低血脂和抗誘變等多種藥理作用，被確認為抗腫瘤劑和治療心血管疾病的有效成分(Donnez，D.，et?al.，Bioproduction?of?resveratrol?and?stilbene?derivatives?by?plant?cells?and?microorganisms.Trends?in?biotechnology，2009.27(12)：p.706-713.)。

隨著反式白藜蘆醇藥理作用的闡明和研究，反式白藜蘆醇正成為人們研究和開發的熱點，在1990年到2000年的十年間共報道有170多篇白藜蘆醇的研究工作，而在2000年到2002年的兩年時間里白藜蘆醇的研究文獻驟然上升到238篇(P.Jeandet，A.C.Douillet-Breuil，R.Bessis，S.Debord，M.Sbaghi，M.Adrian，Phytoalexins?from?the?Vitaceae：Biosynthesis，Phytoalexin?Gene?Expression?in?Transgenic?Plants，Antifungal?Activity，and?Metabolism，Journal?of?Agriculture?and?Food?Chemistry，2002，50：2731-2741)。而同位素¹³C標記反式白藜蘆醇作為研究反式白藜蘆醇在人和動物中代謝吸收的一個重要工具，其重要性越來越受到人們的關注。目前，市場上并沒有專門供應¹³C標記反式白藜蘆醇的公司，國外一些反式白藜蘆醇藥代動力學研究機構中的¹³C標記反式白藜蘆醇的應用也主要來源于化學合成。但是，化學合成除了造價昂貴之外，其生產過程毒性較大也成為制約了這種方式生產的¹³C標記反式白藜蘆醇在臨床研究中的應用。葡萄細胞培養作為生產¹³C標記反式白藜蘆醇的替代方法已受到關注(Krisa，S.，et?al.，Stilbene?production?by?Vitis?vinifera?cell?suspension?cultures：methyl?jasmonate?induction?and?¹³C?biolabeling.J.Nat.Prod，1999.62(12)：p.1688-1690；Aumont，V.，et?al.，Production?of?highly?C-13-labeled?polyphenols?in?Vitis?vinifera?cell?bioreactor?cultures.Journal?of?Biotechnology，2004.109(3)：p.287-294)。

目前國際上通過誘導劑及吸附劑聯合誘導調控同時添加¹³C標記前體來高產量生產¹³C標記反式白藜蘆醇的方法還未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用葡萄(Vitis?vinifera)懸浮細胞培養體系，以一種或多種誘導劑聯合誘導并與吸附劑添加相結合，同時添加¹³C標記前體的聯合調控手段來生產¹³C標記反式白藜蘆醇的方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：