[發(fā)明專(zhuān)利]調(diào)控胚胎干細(xì)胞及早期胚胎的胚層分化的方法和試劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010268307.1
• 申請(qǐng)日: 2010-08-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102382796A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金穎;李翔;朱莉莉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0735
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0735;C12N5/073;C12Q1/66;C12Q1/02
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子信號(hào)通路的調(diào)節(jié)劑的用途，用于制備調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的組合物。

2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的調(diào)節(jié)劑是抑制劑，其用于制備抑制胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的組合物。

3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的抑制劑選自：環(huán)孢素A；FK506；VIVIT；GM6001；PP2；特異性干擾鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶基因表達(dá)的干擾分子；特異性結(jié)合鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的抗體或配體。

4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的調(diào)節(jié)劑是促進(jìn)劑，其用于制備促進(jìn)胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的組合物。

5.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的促進(jìn)劑是一表達(dá)載體，其中含有鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶編碼基因或活化T細(xì)胞核因子編碼基因；

或者，所述的促進(jìn)劑是促進(jìn)Ca²⁺信號(hào)通路的物質(zhì)。

6.如權(quán)利要求1-5任一所述的用途，其特征在于，

所述的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶包括亞基：CnA；或

所述的活化T細(xì)胞核因子包括：NFATc1、NFATc2、NFATc3、NFATc4。

7.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組合物還用于：激活下游靶基因Src或促進(jìn)上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換。

8.一種篩選調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(1)將候選物質(zhì)與含有鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子信號(hào)通路的體系接觸；

(2)檢測(cè)候選物質(zhì)對(duì)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子信號(hào)通路的影響；

若所述候選物質(zhì)提高鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶和/或活化T細(xì)胞核因子的表達(dá)或活性，則表明該候選物質(zhì)是促進(jìn)胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)；

若所述候選物質(zhì)抑制鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶和/或活化T細(xì)胞核因子的表達(dá)或活性，則表明該候選物質(zhì)是抑制胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(1)包括：在測(cè)試組中，將候選物質(zhì)加入到含有鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子信號(hào)通路的體系中；和/或

步驟(2)包括：檢測(cè)測(cè)試組的體系中鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶和/或活化T細(xì)胞核因子的表達(dá)或活性，并與對(duì)照組比較，其中所述的對(duì)照組是不添加所述候選物質(zhì)的含有鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子信號(hào)通路的體系；

如果測(cè)試組中鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶和/或活化T細(xì)胞核因子的表達(dá)或活性在統(tǒng)計(jì)學(xué)上高于對(duì)照組，就表明該候選物質(zhì)是促進(jìn)胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)；

如果測(cè)試組中鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶和/或活化T細(xì)胞核因子的表達(dá)或活性在統(tǒng)計(jì)學(xué)上低于對(duì)照組，就表明該候選物質(zhì)是抑制胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的體系中還包含Src表達(dá)盒，

步驟(2)包括：檢測(cè)候選物質(zhì)對(duì)Src表達(dá)的影響；

若所述候選物質(zhì)促進(jìn)Src表達(dá)，則表明該候選物質(zhì)是促進(jìn)胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)；

若所述候選物質(zhì)抑制Src表達(dá)，則表明該候選物質(zhì)是抑制胚胎干細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育的潛在物質(zhì)。