[發(fā)明專利]一種生物轉(zhuǎn)化沙棘葉黃酮制備高活性苯并吡喃-4-酮的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010266589.1
• 申請日: 2010-08-24
• 公開（公告）號: CN102533892A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李剛;孫允武;朱占軍;馬正創(chuàng);解芳
• 申請（專利權(quán)）人: 青海康普生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12R1/465;C12R1/645
• 代理公司: 西寧金語專利代理事務(wù)所 63101
• 代理人: 哈慶華

1.一種生物轉(zhuǎn)化沙棘葉黃酮制備高活性苯并吡喃-4-酮的方法，其特征在于：所述的方法包括如下步驟：

1)酶法生物轉(zhuǎn)化精提沙棘總黃酮步驟

選用合適的微生物對沙棘葉進(jìn)行發(fā)酵處理；用半纖維素酶的生產(chǎn)菌株，生產(chǎn)所需要的專一性分離轉(zhuǎn)化三羥基苯并吡喃-4-酮的酶，對沙棘總黃酮進(jìn)行精提；利用微生物產(chǎn)生的各種酶充分分解沙棘葉細(xì)胞壁，提高沙棘總黃酮的提取率；對沙棘葉總黃酮的微生物轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行優(yōu)化組合，獲得最大產(chǎn)率；

2)酶法轉(zhuǎn)化沙棘總?cè)~黃酮制備三羥基苯并吡喃-4-酮步驟

(a)L2001β-木聚糖酶：液體發(fā)酵鏈霉菌L2001發(fā)酵條件：農(nóng)業(yè)廢棄物復(fù)合碳源3％，酵母浸膏0.5％，蛋白胨1.0％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.60％，磷酸氫二鉀0.15，40℃條件下140r/min培養(yǎng)，產(chǎn)生的耐熱β-木聚糖酶2000U/ml以上；菌株產(chǎn)酶周期6d；

(b)LM-9β-葡萄糖苷酶：固體發(fā)酵米曲霉LM-9發(fā)酵條件：麩皮與農(nóng)業(yè)廢棄物復(fù)合碳源組分比為2∶3，蛋白胨添加量為培養(yǎng)基干料的1％。營養(yǎng)鹽溶液(％)：硫酸鎂0.13％，磷酸氫二鉀6.5％，硫酸亞鐵0.001％，硝酸鈉0.2％，自然pH；料水比1∶4，30℃條件下培養(yǎng)，生產(chǎn)的β-葡萄糖苷酶2000U以上；菌株產(chǎn)酶周期6d；

(c)酶的固定化

酶轉(zhuǎn)化條件：

①、L2001木聚糖酶20U，料水比1∶10，溫度65℃，pH值5.8，作用時(shí)間1h，酶得率68％以上；

②、LM-9葡萄糖苷酶10U，料水比1∶8，溫度60℃，pH值5.2，作用時(shí)間2h，酶得率68％以上；

③、將L2001木聚糖酶和LM-9葡萄糖苷酶共同作用，料水比1∶8，溫度60℃，pH值5.2，作用時(shí)間2h，沙棘葉黃酮轉(zhuǎn)化率達(dá)65％以上；

3)三羥基苯并吡喃-4-酮分離純化步驟

沙棘總黃酮經(jīng)過L2001木聚糖酶和LM-9葡萄糖苷酶固定化酶處理后得到三羥基苯并吡喃-4-酮，并對其進(jìn)行分離純化，過濾獲得澄清液體，進(jìn)行大孔樹脂吸附解吸，然后進(jìn)行凝縮噴霧干燥獲得成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物轉(zhuǎn)化沙棘葉黃酮制備高活性苯并吡喃-4-酮的方法，其特征在于：所述的農(nóng)業(yè)廢棄物碳源為玉米芯。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物轉(zhuǎn)化沙棘葉黃酮制備高活性苯并吡喃-4-酮的方法，其特征在于：所述的選用合適的微生物是指酵母菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物轉(zhuǎn)化沙棘葉黃酮制備高活性苯并吡喃-4-酮的方法，其特征在于：所述的利用微生物產(chǎn)生的各種酶指β-木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物轉(zhuǎn)化沙棘葉黃酮制備高活性苯并吡喃-4-酮的方法，其特征在于：所述的農(nóng)業(yè)廢棄物碳源是指玉米芯、玉米秸稈、稻麩皮、麥麩皮中的任一種。