[發明專利]一種山羊產羔性狀的分子標記選擇方法

無效

• 申請號: 201010263060.4
• 申請日: 2010-08-26
• 公開（公告）號: CN101899526A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 曹斌云;安小鵬;侯金星;王建剛;宋宇軒;楊明明;朱廣琴;王韻斐;崔易虹;陳秋菊
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.?一種山羊產羔性狀的分子標記選擇方法，其特征在于，包括下列步驟：

1）以山羊基因組DNA為模板，在Taq?DNA聚合酶、緩沖環境、Mg²⁺、dNTPs存在的情況下，利用引物P1和P2在PCR條件下進行擴增，篩查山羊KITL基因內含子1和6的堿基突變；

所述的引物P1如下：

上游引物1F：5′-?TTCCTATGAGGTTACCAATG?-3′；

下游引物1R：5'-?GTAGGCTAAACCTTGTCTTGT?-3'。

所述的引物P2如下：

上游引物2F：5′-?AGAGTTCACAAGACAAGGTT?-3′；

下游引物2R：5'-?ATTAGGTTACTGGCGTTATG?-3'；

所述的PCR擴增的條件是：15μL反應體系，包括：10μmol/L的引物P1、P2的上下游引物各0.6?μL；2×Reaction?Mix?5.825?μL；DNA?Polymerase?0.125μL（2.5?U/μL）；50?ng/μL?DNA?模板0.6?μL；超純水7.25?μL。

所述的PCR擴增反應程序如下：

利用引物P1的PCR擴增反應程序為：95℃預變性5?min，94℃變性30s，49.6℃退火40s，72℃延伸40s，共進行36個循環，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

利用引物P2的PCR擴增反應程序為：95℃預變性5?min，94℃變性30s，56.7℃退火35s，72℃延伸35s，共進行36個循環，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；

2）根據瓊脂糖凝膠電泳對引物P1和引物P2的PCR擴增產物進行大小判定，用限制性內切酶CviAⅡ消化引物P1的PCR擴增產物之后，再采用10%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測酶切后的擴增片段，發現引物P1的PCR擴增產物存在2個堿基的突變，即316bp處有一個T→C的突變L1位點，363bp處有一個G→T的突變L2位點；采用10%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測P2的PCR擴增產物，引物P2擴增產物存在1個堿基的突變，即249bp處有一個G→C的突變L3位點；

3）對引物P1和引物P2的PCR擴增產物進行基因分型和基因頻率分析，以及與關中奶山羊、西農薩能奶山羊和布爾山羊的產羔數之間進行關聯分析結果如下：

在L1位點，純合型T₁T₁在316bp位的堿基是T，雜合型T₁C₁在316bp位的堿基是T/C，純合型C₁C₁在316bp位的堿基是C；

在L2位點，純合型G₂G₂在363bp位的堿基是G，雜合型G₂T₂在363bp位的堿基是G/T，純合型T₂T₂在363bp位的堿基是T；

在L3位點，純合型G₃G₃在249bp位的堿基是G，雜合型G₃C₃在249bp位的堿基是G/C，純合型C₃C₃在249bp位的堿基是C。