[發明專利]利用RsTyrDC制備紅景天甙的方法

有效

• 申請號: 201010261965.8
• 申請日: 2010-08-24
• 公開（公告）號: CN101914121A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 師光祿;馬蘭青;王有年;張繼星;于寒松
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C07H15/18
• 分類號: C07H15/18;C07H1/08;A01H4/00;A01H5/06;C12N15/60;C12N15/82;C12N5/10
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種利用RsTyrDC制備紅景天甙的方法。

背景技術

高山紅景天(Rhodiola?sachalinensis?A.Bor)又名庫頁紅景天，是景天科(Crassulaceae)紅景天屬(Rhodiola?rosea?L.)植物，為多年生草本或亞灌木，常具肉質匍匐根狀莖，是長白山珍稀藥用植物之一。紅景天屬植物的主要活性成分為紅景天甙(salidroside)和甙元酪醇(tyrosol)等，現代藥理學研究結果表明紅景天甙具有明顯的抗缺氧、抗寒冷、抗疲勞、抗輻射、抗病毒、延緩機體衰老等功效，對于航天、深海、沙漠、高原、體育等行業是一種極具開發應用前景的環境適應藥物，同時對高輻射從業人員、微機使用頻繁人員、強腦力勞動者、中老年人群具有積極的滋補保健作用。紅景天甙生物合成最后一步反應機制已經清楚，植物體內的尿苷二磷酸葡萄糖基轉移酶(UDP-glucosyltransferase，UDPGT，UGTs)以尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和酪醇為底物催化合成紅景天甙。而酪醇酪醇生物合成則有可能來源于兩種不同的途徑：一是酪醇可能來源于p-香豆酸的脫羧反應產物，而p-香豆酸來源于苯丙氨酸起始的苯丙烷代謝途徑；另一種可能是酪醇可能來源于4-羥基苯乙醛，而其來自于酪氨酸脫羧反應。有趣的是，苯丙氨酸和酪氨酸又共同來源于一個前體化合物阿羅酸。由于酪醇分子屬于典型的簡單酚類化合物，植物體內的大部分酚類化合物來源于苯丙烷類代謝途徑，苯丙烷類代謝途徑為酪醇的生物合成提供了碳架結構非常相似的前體化合物來源。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種利用RsTyrDC制備紅景天甙的方法。

本發明提供的制備，包括如下步驟：1)將RSTYRDC蛋白的編碼基因導入目的植物，得到轉基因植物；2)從所述轉基因植物中提取紅景天甙，得到紅景天甙；所述RSTYRDC蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

序列2由507個氨基酸殘基組成。

所述RSTYRDC蛋白的編碼基因通過重組根癌農桿菌介導導入目的植物的外植體；

所述RSTYRDC蛋白的編碼基因通過重組植物表達載體導入目的植物的外植體。

所述重組根癌農桿菌為將所述重組植物表達載體導入宿主農桿菌得到的重組根癌農桿菌；

所述重組植物表達載體為將所述RSTYRDC蛋白的編碼基因插入載體pBRin713的BgLII和SpeⅠ識別位點間得到的。

將所述RSTYRDC蛋白的編碼基因導入目的植物，得到轉基因植物的方法包括如下步驟：用重組根癌農桿菌侵染所述目的植物的外植體，再依次進行共培養、抑菌培養、誘導培養、分化培養和生根培養得到所述轉基因植物。

所述用重組根癌農桿菌侵染所述目的植物的外植體的侵染時間為9分鐘。

所述外植體為葉盤。從葉片上通過打孔器打下來的小圓片即為葉盤，可用于轉基因轉染。

所述共培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸和2，4-二氯苯氧乙酸丁酯，得到所述共培養所用的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述共培養所用的培養基中的濃度為2.0mg/L，所述1-萘乙酸在所述共培養所用的培養基中的濃度為0.15mg/L，所述2，4-二氯苯氧乙酸丁酯在所述共培養所用的培養基中的濃度為0.5mg/L；

所述抑菌培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸和頭孢霉素，得到所述抑菌培養所用的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述抑菌培養所用的培養基中的濃度為1.5mg/L，所述1-萘乙酸在所述抑菌培養所用的培養基中的濃度為0.15mg/L，所述頭孢霉素在所述抑菌培養所用的培養基中的濃度為500mg/L；

所述分化培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸和赤霉素，得到所述分化培養所用的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述分化培養所用的培養基中的濃度為1.5mg/L，所述1-萘乙酸在所述分化培養所用的培養基中的濃度為0.05mg/L，所述赤霉素在所述分化培養所用的培養基中的濃度為0.15mg/L；

所述生根培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加1-萘乙酸和潮霉素，得到所述生根培養所用的培養基，所述1-萘乙酸在所述生根培養所用的培養基中的濃度為0.1mg/L，所述潮霉素在所述生根培養所用的培養基中的濃度為1.0mg/L；