[發明專利]利用RsTyrDC制備紅景天甙的方法

有效

• 申請號: 201010261965.8
• 申請日: 2010-08-24
• 公開（公告）號: CN101914121A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 師光祿;馬蘭青;王有年;張繼星;于寒松
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C07H15/18
• 分類號: C07H15/18;C07H1/08;A01H4/00;A01H5/06;C12N15/60;C12N15/82;C12N5/10
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種制備紅景天甙的方法，包括如下步驟：1)將RSTYRDC蛋白的編碼基因導入目的植物，得到轉基因植物；2)從所述轉基因植物中提取紅景天甙，得到紅景天甙；所述RSTYRDC蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述RSTYRDC蛋白的編碼基因通過重組根癌農桿菌介導導入目的植物的外植體；

所述RSTYRDC蛋白的編碼基因通過重組植物表達載體導入目的植物的外植體。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述重組根癌農桿菌為將所述重組植物表達載體導入宿主農桿菌得到的重組根癌農桿菌；

所述重組植物表達載體為將所述RSTYRDC蛋白的編碼基因插入載體pBRin713的多克隆位點間得到的。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：將所述RSTYRDC蛋白的編碼基因導入目的植物，得到轉基因植物的方法包括如下步驟：用重組根癌農桿菌侵染所述目的植物的外植體，再依次進行共培養、抑菌培養、誘導培養、分化培養和生根培養得到所述轉基因植物。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述用重組根癌農桿菌侵染所述目的植物的外植體的侵染時間為9分鐘。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述外植體為葉盤。

7.根據權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

所述共培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸和2，4-二氯苯氧乙酸丁酯，得到所述共培養所用的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述共培養所用的培養基中的濃度為2.0mg/L，所述1-萘乙酸在所述共培養所用的培養基中的濃度為0.15mg/L，所述2，4-二氯苯氧乙酸丁酯在所述共培養所用的培養基中的濃度為0.5mg/L；

所述抑菌培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸和頭孢霉素，得到所述抑菌培養所用的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述抑菌培養所用的培養基中的濃度為1.5mg/L，所述1-萘乙酸在所述抑菌培養所用的培養基中的濃度為0.15mg/L，所述頭孢霉素在所述抑菌培養所用的培養基中的濃度為500mg/L；

所述分化培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸和赤霉素，得到所述分化培養所用的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述分化培養所用的培養基中的濃度為1.5mg/L，所述1-萘乙酸在所述分化培養所用的培養基中的濃度為0.05mg/L，所述赤霉素在所述分化培養所用的培養基中的濃度為0.15mg/L；

所述生根培養所用的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加1-萘乙酸和潮霉素，得到所述生根培養所用的培養基，所述1-萘乙酸在所述生根培養所用的培養基中的濃度為0.1mg/L，所述潮霉素在所述生根培養所用的培養基中的濃度為1.0mg/L；

所述誘導培養的培養基按照如下方法制備：向MS培養基中添加6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸、潮霉素和頭孢霉素，得到所述誘導培養的培養基，所述6-芐氨基嘌呤在所述誘導培養的培養基中的濃度為1.5mg/L，所述1-萘乙酸在所述誘導培養的培養基中的濃度為0.15mg/L，所述潮霉素在所述誘導培養的培養基中的濃度為2.5mg/L，所述頭孢霉素在所述誘導培養的培養基中的濃度為500mg/L；

所述共培養的時間為3天，所述共培養的溫度為25℃，所述共培養為連續光照；

所述抑菌培養的時間為5天，所述抑菌培養的溫度為25℃，所述抑菌培養為連續光照；

所述誘導培養的溫度為25℃，所述誘導培養為連續光照。

所述分化培養的時間為8周，所述分化培養的溫度為25℃，所述分化培養為連續光照；

所述生根培養的時間為6周，所述生根培養的溫度為25℃，所述生根培養為連續光照。