[發明專利]汞離子抗原及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201010259922.6
• 申請日: 2010-08-20
• 公開（公告）號: CN101914152A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 王保民;南鐵貴;趙洪偉;譚桂玉;高巍;譚偉明;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種汞離子抗原及其制備方法與應用。

背景技術

汞是環境與農產品的一個重要污染物質，由于其能在人體和環境中長期蓄積，且可以通過食物鏈的富集作用傳遞給人或動物，給人類健康帶來了嚴重的危害。如50年代中期在日本曾經因食用重金屬汞污染的魚而出現了震驚世界的水俁病，從而使環境中汞污染的健康危害問題得到了全世界的關注。環境中的汞的大量蓄積主要是因為工業三廢的無序、超限排放，從而造成大量的土壤和水體污染，造成環境惡化。

重金屬汞的分析方法有原子吸收光譜法、電感耦合等離子體發射光/質譜法、X-射線熒光光譜法及電位溶出分析法等。這幾種儀器檢測方法檢測重金屬汞不僅需要昂貴的儀器設備，而且檢測費用高、檢測時間長和檢測步驟繁雜，不能用于現場的快速檢測。免疫分析法是利用抗原與抗體的特異性結合反應而建立的一種分析方法，與儀器分析法相比，免疫分析法具有快速、便宜、簡便、實時、易于進行現場檢測、樣品前處理簡單、靈敏度高、選擇性強、適合于高通量分析等優點。免疫檢測試劑盒可以快速檢測某一特定物質的含量，但要將免疫分析法應用到檢測重金屬離子汞，必須制備相應的抗原和抗體。目前，國內外文獻報道的檢測方法主要利用氨羧類螯合劑進行，螯合劑螯合重金屬汞后制備重金屬汞完全抗原，所制備的抗體只能識別重金屬與螯合劑復合物，且需對樣品進行復雜的前處理。

發明內容

本發明的一個目的是提供制備汞離子抗原的方法。

本發明所提供的方法，包括如下步驟：

1)活化4-巰基苯基乙酸，得到活化的4-巰基苯基乙酸；

2)將步驟1)得到的活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白偶聯，得到活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物；

3)將步驟2)得到的所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物與汞離子螯合，得到所述偶聯物和汞離子的螯合物，即得到汞離子抗原。

步驟1)活化4-巰基苯基乙酸的方法包括如下步驟：

A、將4-巰基苯基乙酸溶解于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到I液；

B、將二環己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺溶于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到II液，

C、將I液和II液混合，攪拌反應，離心，收集上清液，即得到活化的4-巰基苯基乙酸；

步驟2)將步驟1)得到的活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白偶聯的方法包括如下步驟：D、將步驟C得到的活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白溶液混合，反應；

步驟3)將步驟2)得到的所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物與汞離子螯合的方法包括如下步驟：E、將所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物與汞離子溶液混合，反應。

步驟1)中，所述二環己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺與4-巰基苯基乙酸的投料摩爾比(此處摩爾比至少為1∶1∶1，要求4-巰基苯基乙酸徹底反應完畢，DCC與NHS的摩爾量不應小于4-巰基苯基乙酸的摩爾量，但是二環己基碳二亞胺與N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾量也不宜過多，過多易導致蛋白質自身偶聯)為不小于1∶1∶1，具體為2∶2∶1；

步驟2)中，所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的投料摩爾比為15∶1；

步驟3)中，所述偶聯物與汞離子的投料摩爾比為1∶5。

步驟1)中，所述步驟C中，攪拌反應的條件為：反應溫度為25℃、反應時間為12小時、避光；所述離心轉速為10000g，離心時間為10min；

步驟2)中，所述步驟D的反應條件為：反應溫度為25℃，反應時間為12小時，反應的pH為9.5；

步驟3)中，所述步驟E的反應條件為：反應溫度25℃，反應時間24小時。

所述步驟2)中，所述載體蛋白溶液為按如下方法制備：將載體蛋白溶解到緩沖液中得到載體蛋白溶液；所述緩沖液為碳酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，pH為9.6；所述載體蛋白為卵清白蛋白或牛血清白蛋白；

所述步驟3)中，所述汞離子溶液為氯化汞水溶液。

所述步驟2)的D中，在所述反應后，包括將反應產物進行透析的步驟；所述透析液為濃度為0.1M、PH值為9.5的PBS緩沖液。

所述步驟3)的E中，在所述反應后，包括將反應產物進行透析得到汞離子抗原的步驟，所述透析液為濃度為0.1M、PH值為9.5的PBS緩沖液。

由上述任一所述方法制備得到的汞離子抗原也屬于本發明的保護范圍。

本發明的另一個目的是提供一種汞離子抗原。