[發明專利]汞離子抗原及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201010259922.6
• 申請日: 2010-08-20
• 公開（公告）號: CN101914152A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 王保民;南鐵貴;趙洪偉;譚桂玉;高巍;譚偉明;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種制備汞離子抗原的方法，包括如下步驟：

1)活化4-巰基苯基乙酸，得到活化的4-巰基苯基乙酸；

2)將步驟1)得到的活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白偶聯，得到活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物；

3)將步驟2)得到的所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物與汞離子螯合，得到所述偶聯物和汞離子的螯合物，即得到汞離子抗原。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟1)活化4-巰基苯基乙酸的方法包括如下步驟：

A、將4-巰基苯基乙酸溶解于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到I液；

B、二環己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺溶于N，N′-二甲基甲酰胺中，得到II液；

C、將I液和II液混合，攪拌反應，離心，收集上清液，即得到活化的4-巰基苯基乙酸；

步驟2)將步驟1)得到的活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白偶聯的方法包括如下步驟：D、將步驟C得到的活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白溶液混合，反應；

步驟3)將步驟2)得到的所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物與汞離子螯合的方法包括如下步驟：E、將所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的偶聯物與汞離子溶液混合，反應。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟1)中，所述二環己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺與4-巰基苯基乙酸的投料摩爾比為不小于1∶1∶1，具體為2∶2∶1；

步驟2)中，所述活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白的投料摩爾比為15∶1；

步驟3)中，所述偶聯物與汞離子的投料摩爾比為1∶5。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1)中，所述步驟C中，攪拌反應的條件為：反應溫度為25℃、反應時間為12小時、避光；所述離心轉速為10000g，離心時間為10min；

步驟2)中，所述步驟D的反應條件為：反應溫度為25℃，反應時間為12小時，反應的pH為9.5；

步驟3)中，所述步驟E的反應條件為：反應溫度25℃，反應時間24小時。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述步驟2)中，所述載體蛋白溶液為按如下方法制備：將載體蛋白溶解到緩沖液中得到載體蛋白溶液；所述緩沖液為碳酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，pH為9.6；所述載體蛋白為卵清白蛋白或牛血清白蛋白；

所述步驟3)中，所述汞離子溶液為氯化汞水溶液。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述步驟2)的D中，在所述反應后，包括將反應產物進行透析的步驟；

所述步驟3)的E中，在所述反應后，包括將反應產物進行透析得到汞離子抗原的步驟。

7.由權利要求1-6中任一所述方法制備得到的汞離子抗原。

8.一種汞離子抗原，是活化的4-巰基苯基乙酸與載體蛋白通過共價鍵連接形成的偶聯物與汞離子通過配位鍵連接形成的絡合物；所述共價鍵是活化的4-巰基苯基乙酸上的羧基與載體蛋白上的氨基形成的；所述配位鍵是偶聯物中活化的4-巰基苯基乙酸上的巰基與汞離子形成的；所述活化的4-巰基苯基乙酸的化學結構式如下所示：

；所述載體蛋白為卵清白蛋白或牛血清白蛋白。

9.由權利要求7或8所述汞離子抗原得到的抗體。

10.權利要求7或8所述汞離子抗原和/或權利要求9中所述抗體在檢測樣品中汞離子中的應用；

權利要求7或8所述汞離子抗原和/或權利要求9中所述抗體在制備用于檢測樣品中汞離子的酶聯免疫試劑盒中的應用；

權利要求7或8所述汞離子抗原和/或權利要求9中所述抗體在制備用于檢測樣品中汞離子的發光免疫試劑盒中的應用；

權利要求7或8所述汞離子抗原和/或權利要求9中所述抗體在制備用于檢測樣品中汞離子的免疫親和色譜柱中的應用；

所述樣品為水體、食品或土壤。