[發(fā)明專利]一種適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑組合物及使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010257107.6
• 申請日: 2010-08-19
• 公開（公告）號: CN101946809A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏時云;劉亞
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心
• 主分類號: A01N65/22
• 分類號: A01N65/22;A01N43/80;A01N37/46;A01N65/08;A01N65/12;A01P1/00;A01P3/00;A01H4/00
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 王融生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域中的植物組織培養(yǎng)技術(shù)；涉及一種適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑組合物及使用方法。

背景技術(shù)：

植物組培苗工廠化生產(chǎn)在我國發(fā)展速度很快，組織培養(yǎng)各方面的技術(shù)日漸完善。但在組織培養(yǎng)中常常出現(xiàn)不同程度的污染。據(jù)了解，很多學(xué)者在初代培養(yǎng)這一階段，很難得到無菌苗，或者雖然在初代培養(yǎng)得到了無菌苗，但在繼代培養(yǎng)時往往出現(xiàn)大量污染甚至全部污染。因此，控制或降低污染率是植物組織培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)中不可忽視的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，同時也是衡量組織培養(yǎng)工作效率高低的重要指標(biāo)之一。從植物組織培養(yǎng)的全過程來看，每一環(huán)節(jié)都可能出現(xiàn)污染，為了實(shí)現(xiàn)低污染率，在組織培養(yǎng)過程中除了加強(qiáng)無菌意識，提高無菌操作各環(huán)節(jié)的技術(shù)規(guī)程，注重?zé)o菌操作訓(xùn)練，提高操作水平外，同時在培養(yǎng)基中針對性的加入抑菌劑、抗菌素等，也是減少或防止真菌和細(xì)菌污染的重要手段和方法。研究和篩選、推廣使用新型抑菌劑，對于減少或防止真菌和細(xì)菌污染、降低種苗生產(chǎn)成本，具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑組合物及使用方法。用于植物組織培養(yǎng)中，可減少或防止真菌和細(xì)菌污染的抑菌劑組合物。它可廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)快速繁殖、再生植株體系建立等植物生物技術(shù)領(lǐng)域。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑組合物(以下簡稱抑菌劑)是指含ε-聚賴氨酸、異噻唑啉酮和中草藥訶子、千里光、香薷水提物及其他如檸檬酸、苯甲酸鈉及穩(wěn)定劑等。用于植物外植體消毒處理中，先用本發(fā)明的抑菌劑浸泡后再常規(guī)消毒處理，可減少升汞或次氯酸鈉的消毒時間，從而到既滅菌又可保持外植體較高存活率的目的；在初代或繼代培養(yǎng)基中加入抑菌劑，可以有效減少或防止真菌和細(xì)菌污染，使植物組織正常生長發(fā)育，對植物的生根、生長、分化等幾乎無不良影響，提高組織培養(yǎng)成功率；應(yīng)用在植物開放式組織培養(yǎng)中，如植物培養(yǎng)后期的壯苗生根階段，可用塑料杯(瓶、盒)作培養(yǎng)容器，省去培養(yǎng)基高壓滅菌程序，且不需超凈工作臺也可接種，脫離嚴(yán)格無菌的操作環(huán)境，可以節(jié)約大量的能源、大大降低了植物組培苗的生產(chǎn)和運(yùn)輸成本。

一種適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑，其特征在于：其組成成分及配比為：

在抑菌劑組合物總體積100ml中含有：

ε-聚賴氨酸2.5ml，其中有效含量≥50％、

異噻唑啉酮混合物，其中有效含量≥50％?22～29.5ml、

中草藥水提物10～15ml：中藥水提物由訶子、千里光及香薷1∶1∶2加水浸泡4h后用溫火煎煮而成，每100ml中含生藥4g、

檸檬酸、苯甲酸鈉水溶液，其濃度為3.5％?2.5ml、

穩(wěn)定劑：MgCl₂，水溶液，其濃度5.5％?3.5ml、

無離子水47.0～59.5ml。

所述的一種適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑，其使用方法：

1)用于植物外植體消毒處理中，先用抑菌劑浸泡后，再常規(guī)消毒處理，可減少升汞或次氯酸鈉的處理時間；

2)在初代或繼代培養(yǎng)基中加入抑菌劑0.25～0.4％，可有效減少或防止真菌和細(xì)菌的污染；

3)應(yīng)用在植物開放式組織培養(yǎng)中，如植物培養(yǎng)后期的壯苗生根階段，加入該抑菌劑，可省去培養(yǎng)基高壓滅菌程序，不需超凈工作臺也可接種。

所述一種適用于植物組織培養(yǎng)的抑菌劑，其使用方法：

1)應(yīng)用該抑菌劑時，植物組織培養(yǎng)可在無菌或相對較少有菌條件下實(shí)施；其詳細(xì)過程包括：

(1)按先后順序取ε-聚賴氨酸2.5ml、異噻唑啉酮混合物，有效含量≥50％，的22～29.5ml、中草藥水提物10～15ml、檸檬酸、苯甲酸鈉2.5ml，放入100ml容量瓶中，震蕩混合均勻，再加入穩(wěn)定劑3.5ml，用無離子水定容于100ml，倒入棕色試劑瓶中，放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)將培養(yǎng)基煮沸溶解，進(jìn)行常規(guī)的高溫高壓滅菌。待培養(yǎng)基冷卻至45℃左右后，以配制1L培養(yǎng)基計算，在培養(yǎng)基中加入該抑菌劑2.5～4.0ml，然后分裝于已高溫高壓滅菌的培養(yǎng)容器內(nèi)；

(3)分裝后，用封口膜、聚丙烯膜、玻璃紙或硫酸紙扎緊瓶口；

(4)將分裝封口后的培養(yǎng)基，放入操作室冷卻，備用；

(5)植物外植體在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行常規(guī)消毒處理后，將其直接接種于含有抑菌劑的培養(yǎng)基中；

(6)接種后的日常管理：將接種后的培養(yǎng)材料置于滿足植物組織培養(yǎng)的溫度、光照條件的房間或設(shè)施內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)；

(7)壯苗生根培養(yǎng)可以在相對較少有菌的條件下實(shí)施：培養(yǎng)基無需高壓滅菌，接種也不需超凈工作臺。