[發明專利]氰脲酸半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201010256925.4
• 申請日: 2010-08-17
• 公開（公告）號: CN101962368A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 孫遠明;雷紅濤;沈玉棟
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07D251/32
• 分類號: C07D251/32;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術領域

本發明屬于食品安全技術領域。具體涉及氰脲酸半抗原、人工抗原和抗體的制備方法及應用。

背景技術

氰脲酸又名1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮，S-三嗪-2，4，6-三醇，異氰脲酸，2，4，6-三(2-羥基-4-正丁氧基苯基)-1，3，5-三嗪，對稱三羥基三氮雜苯，2，4，6-三羥基-1，3，5-三嗪，均三嗪三醇，2，4，6-三羥基-1，3，5-三嗪，CAS號：108-80-5，結構式為：

氰脲酸可以作為三聚氰胺的一種雜質出現；氰脲酸也是美國食品和藥品管理局認可的可以用作反芻動物飼料添加劑的縮二脲的一種成分；它還被用作二氯異氰脲酸消毒劑的分解物，可在游泳池水中發現。消費者接觸這一化學品的可能途徑是：食用被非法添加三聚氰胺或者氰脲酸的食品、喝了游泳池的水、飲用由地表水處理后的飲水，以及食用體內積存此化學品的魚類。對飲水消毒時，二氯異氰脲酸鈉迅速脫氯，形成氰脲酸(有關文獻命名為氰尿酸)。

氰脲酸對哺乳動物具有低急性毒性，大鼠的經口半數致死量為每公斤體重7700毫克。幾項亞慢性經口毒性研究項目顯示，氰脲酸造成腎組織損傷，其中包括腎小管擴張，腎小管上皮壞死或增生，嗜堿性腎小管增加，中性粒細胞浸潤，以及礦化和纖維化。

對氰脲酸殘留的檢測目前主要采用高效液相色譜法(HPLC)。然而應用HPLC時樣品前處理非常繁瑣，測定方法相當復雜，需受過專門訓練的人員才能操作，檢測通量很小，而且監測成本昂貴。因此，目前我國相應的氰脲酸檢測技術并不很完備，很有必要研制更加簡單快捷方便的檢測產品。

免疫檢測方法，是目前食品安全快速檢測的重要方法，檢測成本很低，使用簡單，非常適合大量樣品的篩選檢測，已經在食品安全監管中發揮了重要作用。

但任何半抗原物質免疫檢測方法的建立，都必須首先制備出氰脲酸半抗原、抗原及抗體，然后才能利用這些試劑建立免疫檢測方法。因此，半抗原合成、人工抗原及其抗體制備，是氰脲酸免疫分析方法建立的難點。半抗原物質的抗體生產涉及分析化學、有機化學、免疫學、生物學等知識背景，任何一個環節失敗，皆不能成功?？乖O計的合理性確定了合成的難度，同時決定了抗體的特異性，目前尚沒有成熟的理論完全預測。因此，盡管氰脲酸的快速檢測有很大的需求，但由于半抗原物質抗體制備技術的復雜性合成的難度，國內外目前尚未見氰脲酸免疫分析的任何報導。

發明內容

本發明的一個目的是填補氰脲酸現有檢測技術的不足，提供一種可應用于氰脲酸免疫檢測方面的氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特異性抗體。

本發明的另一個目的是提供所述氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特異性抗體的制備方法。

本發明還有一個目的是提供所述氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特異性抗體的應用。

本發明的目的通過以下技術方案予以實現：

提供一種氰脲酸人工半抗原、人工抗原和特異性單克隆抗體，所述氰脲酸人工半抗原具有式(I)所示分子結構：

其中，n為-CH₂基團數目，n＝1～8。

所述氰脲酸人工抗原，具有式(II)所示分子結構：

其中，n為-CH₂基團數目，n＝1～8。

本發明提供了所述氰脲酸半抗原的制備方法，是將1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮與溴代羧酸芐酯反應生成含羧基的半抗原；

氰脲酸半抗原合成路線如下：

本發明所述氰脲酸半抗原的制備包括以下步驟：

(1)將氰脲酸和溴代羧酸芐酯裝入圓底燒瓶中，加入少量N，N-二甲基甲酰胺(又名二甲基甲酰胺，DMF)溶解反應物；

(2)往步驟(1)溶解好的反應物中加入與氰脲酸等物質量的催化劑，反應后減壓蒸除溶劑DMF，用四氫呋喃溶解殘渣A，過濾，濾液濃縮至干，得殘渣B；

(3)殘渣B用二氯甲烷+甲醇(95+5)為展開劑柱層析，獲得中間產物，用過量氫氧化鉀溶液充分水解中間產物，再用濃鹽酸酸化至pH值為3～6，蒸干溶劑得白色固體，白色固體用冷水洗滌后得目標半抗原。

上述步驟(1)所述氰脲酸和溴代羧酸芐酯的投料摩爾比為6∶1～1∶1。

步驟(1)所述溴代羧酸芐酯優選n＝1～8的溴代羧酸芐酯。

步驟(2)所述催化劑為碳酸鉀、三乙胺或其他堿性催化劑如DMAP(4-二甲氨基吡啶)。

步驟(2)所述反應的反應溫度為40～80℃，反應時間為5～24h。

步驟(3)所述冷水洗滌次數為3～5次。