[發(fā)明專利]氰脲酸半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010256925.4
• 申請(qǐng)日: 2010-08-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101962368A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫遠(yuǎn)明;雷紅濤;沈玉棟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D251/32
• 分類號(hào): C07D251/32;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種氰脲酸人工半抗原，其特征在于是將1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮與溴代羧酸芐酯反應(yīng)制備得到，具有式(I)所示分子結(jié)構(gòu)：

其中，n為-CH₂基團(tuán)數(shù)目，n＝1～8。

2.一種權(quán)利要求1所述氰脲酸人工半抗原的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將氰脲酸和溴代羧酸芐酯裝入圓底燒瓶中，加入少量N，N-二甲基甲酰胺溶解反應(yīng)物；

(2)往步驟(1)溶解好的體系中加入與氰脲酸等物質(zhì)量的催化劑，反應(yīng)后減壓蒸除N，N-二甲基甲酰胺，用四氫呋喃溶解殘?jiān)麬，過(guò)濾，濾液濃縮至干，得殘?jiān)麭；

(3)殘?jiān)麭用二氯甲烷+甲醇(95+5)為展開(kāi)劑柱層析，獲得中間產(chǎn)物，用過(guò)量氫氧化鉀溶液充分水解中間產(chǎn)物，再用濃鹽酸酸化，蒸干溶劑得白色固體，白色固體用冷水洗滌后得目標(biāo)半抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所述氰脲酸和溴代羧酸芐酯的投料摩爾比為6∶1～1∶1；步驟(1)所述溴代羧酸芐酯為n＝1～8的溴代羧酸芐酯。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)所述催化劑為碳酸鉀、三乙胺或4-二甲氨基吡啶。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)所述反應(yīng)的反應(yīng)溫度為40～80℃，反應(yīng)時(shí)間為5～24h。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(3)所述濃鹽酸酸化是將中間產(chǎn)物酸化至pH值為3～6。

7.一種氰脲酸人工抗原，其特征在于是將權(quán)利要求1所述的氰脲酸半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)制備得到，具有式(II)所示分子結(jié)構(gòu)：

其中，n為-CH₂基團(tuán)數(shù)目，n＝1～8。

8.一種權(quán)利要求7所述氰脲酸人工抗原的制備方法，其特征在于采用活潑脂法或者混合酸酐法將權(quán)利要求1所述的氰脲酸半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將所述半抗原溶解于溶劑中，所述溶劑優(yōu)選二氧六環(huán)或二甲基甲酰胺；

(2)往步驟(1)溶解好的體系中加入二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫反應(yīng)后離心除去沉淀，得上清液；二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入量?jī)?yōu)選按照摩爾比1∶1的比例確定；

(3)將上清液滴入pH值為7.4～9.55的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液中，緩沖液中含有10mg/mL的載體蛋白，反應(yīng)2～4h后，將反應(yīng)液裝入透析袋，用0.85％的生理鹽水透析3～4天，得人工抗原；

或者包括以下步驟：

(1)將權(quán)利要求2或3制備得到的半抗原溶解于溶劑中；所述溶劑優(yōu)選二氧六環(huán)或二甲基甲酰胺；

(2)往步驟(1)體系中加入氯甲酸異丁酯，4℃反應(yīng)得甲液；

將載體蛋白溶于1mol/L?pH值為9.6的碳酸氫鈉緩沖液中，得乙液；載體蛋白優(yōu)選BSA或KLH或CONA或THY或OVA；

(3)將甲液緩慢滴加到乙液中，4℃攪拌反應(yīng)過(guò)夜，將反應(yīng)液裝入透析袋，用0.85％的生理鹽水透析3d，得人工抗原。

10.一種權(quán)利要求7所述抗原的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于制備特異性抗體或氰脲酸免疫檢測(cè)方面。