[發(fā)明專利]一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010256510.7
• 申請(qǐng)日: 2010-08-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102373245A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-03-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇建勇;鄭南華;張建宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海漢飛生化科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P13/02
• 分類號(hào): C12P13/02;C12N11/02
• 代理公司: 上海科盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 趙志遠(yuǎn)

1.一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)固定化酶的制備

取三乙醇胺陰離子苯乙烯樹(shù)脂，用碳酸鉀溶液浸泡6-18h后過(guò)濾，再將濾出的三乙醇胺陰離子苯乙烯樹(shù)脂與碳酸鉀、溴化氫按重量比為1∶(0.1-0.6)∶(0.2-0.5)配制成溶液，于冰浴中反應(yīng)5-60min，調(diào)節(jié)pH值至7-10，再加入精氨酸酶，使其與三乙醇胺陰離子苯乙烯樹(shù)脂的重量比為(0.002-0.01)∶1，于1-10℃反應(yīng)12-48h，洗滌后用飽和食鹽水浸泡0.5-3h，再利用去離子水洗凈至溶液中檢測(cè)不出氯離子，即得固定化酶，保存于水中；

(2)轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化

將步驟(1)中制得的固定化酶與精氨酸、乙酸錳按重量比1∶(1-3)∶(0.004-0.02)混合，加入去離子水中，攪拌，采用乙酸調(diào)節(jié)pH值至9.0-9.4，在35-40℃下，反應(yīng)15-18h得固定化酶混懸液；

(3)產(chǎn)物提取及精制

將步驟(2)中的固定化酶混懸液過(guò)濾后，向?yàn)V液中加α-酮戊二酸、活性炭，于20℃以下攪拌反應(yīng)5-30min后，過(guò)濾，加入醇類，攪拌0.5-1h，析出L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽2∶1，攪拌3-5h，再經(jīng)降溫至20℃以下、離心、干燥即得產(chǎn)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中的溶液中含三乙醇胺陰離子苯乙烯樹(shù)脂的重量百分濃度為40-60g/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中的碳酸鉀為摩爾濃度1-5M的溶液，所述的溴化氫為重量百分濃度1-4g/ml的溶液，所述的精氨酸酶為重量百分濃度1-4g/L的溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中調(diào)節(jié)pH采用摩爾濃度為0.05-2M的碳酸氫鈉溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中洗滌過(guò)程是依次利用體積為100-400ml，濃度為0.05-0.3M的碳酸氫鈉溶液、0.5-4M的氯化鈉溶液及去離子水洗滌2-5次。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中攪拌反應(yīng)的攪拌速度為70-80rpm，反應(yīng)終點(diǎn)利用高效液相(HPLC)控制。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中加入α-酮戊二酸量為：[(精氨酸量×0.96)×133/174]-(調(diào)pH所用的乙酸量)，活性炭的加入量為2-5g/100ml濾液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中反應(yīng)液L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的重量百分?jǐn)?shù)為30-33％。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中的醇類包括甲醇、乙醇或正丙醇。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-鳥(niǎo)氨酸-α-酮戊二酸鹽的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中加入醇類后的攪拌反應(yīng)的溫度為20℃以下。