[發明專利]一種HLA基因分型的PCR-SBT方法及其試劑

有效

• 申請號: 201010256435.4
• 申請日: 2010-08-18
• 公開（公告）號: CN101928776A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 朱發明;章偉;嚴力行
• 申請（專利權）人: 浙江省血液中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

1.一種HLA基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于它對HLA-A位點1-7外顯子、HLA-B位點1-7外顯子、HLA-C位點1-7外顯子進行基因分型，包括以下步驟：

（1）、制備人基因組DNA；

（2）、設計擴增引物，用聚合酶鏈反應分別擴增人基因組DNA中HLA-A、HLA-C位點基因外顯子1-8全長序列和HLA-B位點基因外顯子1-7全長序列；

（3）、將步驟（2）得到的擴增產物進行雙酶切純化；

（4）、設計測序引物，將步驟（3）得到的純化產物進行測序PCR反應；

（5）、將步驟（4）得到的測序產物進行醋酸鈉-乙醇沉淀法純化，進行毛細管電泳測序；

（6）、將步驟（5）獲得的序列通過軟件分析，確定其基因型。

2.如權利要求1所述的一種HLA基因分型的PCR-SBT方法，其特征在于所述步驟（2）中的引物為：

HLA-A基因組全長擴增引物對HLA-AF1和HLA-AR或者HLA-AF2和HLA-AR，

HLA-AF1：5’-TGTCGGGTTTCCAGAGAAGC-3’

HLA-AF2：5’-GGGTTTCCAGAGAAGCCAAT-3’

HLA-AR：5’-TTGGGGAGGGAGCACAGGTCAGCGTGGGAAG-3’；

HLA-B基因組全長擴增引物對HLA-BF1和HLA-BR或者HLA-BF2和HLA-BR，

HLA-BF1：5’-GGCAGACAGTGTGACAAAGAGGC-3’

HLA-BF2：5’-?GAGTTTCACTTCTTCTCCCAAC-3’

HLA-BR：5’-?CTGGGGAGGAAACACAGGTCAGCATGGG-3’；

HLA-C基因組全長擴增引物對HLA-CF1和HLA-CR或者HLA-CF2和HLA-CR，

HLA-CF1：5’-?TCAGGCACACAGTGTGACAAAGAT-3’

HLA-CF2：5’-?CCAATTCCCACTCCCATTG-3’

HLA-CR：5’-?TCGGGGAGGGAACACAGGTCAGTGTGGGGAC-3’；

所述步驟（4）中的引物為用于測序分析的36條寡核苷酸測序引物；?

HLA-A外顯子1-7的測序引物：

HLA-A1F：5’-?GGGTTTCCAGAGAAGCCAAT-3’

HLA-A1R：5’-?CMCGACCCCGCACTCACC-3’

HLA-A2F：5’-?GCCTCTGYGGGGAGAAGC-3’

HLA-A2R：5’-GCCCGTCCGTGGGGGATGA-3’

HLA-A3F：5’-?CCCACAGTCTCCGGGTCCGA-3’

HLA-A3R：5’-?GTCCCAAWTGTCTCCCCTCCTT-3’

HLA-A4F：5’-?GGTGTSCTGTCCATTCTCAAG-3’

HLA-A4R：5’-GACACCCCCRTCTCCCTC?-3’

HLA-A5F：5’-?CCACAAGGAGGGGAGACAAT-3’

HLA-A5R：5’-?CACCTGAGCTRTTCCTCCTC-3’

HLA-A67F：5’-?CACATTTCTGGAAACTTCTCTG-3’

HLA-A67R：5’-?CGCATGCTCAATACATCCAA-3’；

HLA-B外顯子1-7的測序引物：

HLA-B1F：5’-?GIGGTCCCAGTTCTAAAGTCC-3’

HLA-B1R：5’-?ACTCACCRGCCCAGGTCT-3’

HLA-B2F：5’-?GCCGCGCCGGKAGGAGGGTC-3’

HLA-B2R：5’-?GACCCSGGCCGTMCGT-3’

HLA-B3F：5’-?ACCICGIGGICIGGGCCAG-3’

HLA-B3R：5’-?GGCCATCCCCGSCGACCTAT-3’

HLA-B4F：5’-?GGTCACATGGGTGGTCCTAG-3’

HLA-B4R：5’-?GGGCTCCTGCTTTCCCTG-3’

HLA-B5F：5’-?GTCRGGRCCCCTCRTCTTC-3’

HLA-B5R：5’-?TTCATTGTCACATGTGCTG-3’

HLA-B67F：5’-?GTCCAGGACCCACACTTGCT-3’

HLA-B67R：5’-?CCCACTCTAGACCCCAAGAA-3’；

HLA-C外顯子1-7的測序引物：

HLA-C1F：5’-?CCAATTCCCACTCCCATTG-3’

HLA-C1R：5’-?TCCYAACCYCGCACTCAC-3’

HLA-C2F：5’-?GACCCGGGGAGCCGCGCA-3’

HLA-C2R：5’-?CGACCCGGG?CCGTCCGTG-3’

HLA-C3F：5’-?ACCICGIGGICIGGGCCAG-3’

HLA-C3R：5’-AGGCCATICCGGGAGATCTA?-3’

HLA-C4F：5’-?GGTGTCCTGTCCITTCTCA-3’

HLA-C4R：5’-?GICTICTGCTTTCICTGA-3’

HLA-C5F：5’-?GCCCTTCAGCYRGGTCAG-3’

HLA-C5R：5’-?ACTTCTACCTGGGGCTTGAA-3’

HLA-C67F：5’-?GGGTCCAAGACTAGGAGGTT-3’

HLA-C67R：5’-?CACCACACATTCGAAACGTC-3’。