[發明專利]一種透明質酸的生物發酵提取方法

無效

• 申請號: 201010255232.3
• 申請日: 2010-08-13
• 公開（公告）號: CN101914594A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 張曉東;葉傳發
• 申請（專利權）人: 武漢嘉發膠原蛋白研究所
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12N13/00;C12N15/01;C08B37/08;C12R1/465
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及生物發酵技術領域(基因、細胞、發酵工程)，更具體涉及一種透明質酸的生物發酵提取方法。

背景技術

透明質酸廣泛存在于動物的各種組織中，其重要功能是保持細胞水分，提高創口愈合再生能力，減少疤痕，增強免疫力等作用。可用于非甾體消炎藥，關節炎治療，眼科、心外科手術的輔助藥品。在治療燙傷、燒傷、凍傷、人造皮膚方面有獨到作用。目前生產透明質酸是自雞、羊等動物組織中提取，原料限制高，生產成本高，生物發酵提取透明質酸不受原料限制，且安全可靠。

透明質酸可以廣泛用于食品、保健品、化妝品、藥品等領域，另外由透明質酸配制的生化試劑，在生物學界被廣泛推廣應用。

透明質酸在上世紀三十年代歐美國家已有研究，并在七十年代開始自動物組織中提取，而國內在九十年代才開始研究并用傳統提取法小批量生產。傳統法大量采用丙酮等有機溶劑，環境污染大且存在安全隱患，而生物發酵法，安全可靠無污染。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種透明質酸的生物發酵提取方法，方法易行，操作簡便，生產周期短、成本低、不產生任何有毒有害物質，安全，高效節能，生產過程中不產生污染。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種透明質酸生物發酵提取方法，其步驟如下：

1、以鏈球菌為原菌株，以紫外線和亞硝基胍為誘變劑，對原菌株進行誘變，再通過對誘變株分離、初篩、復篩和性能檢測，得到生產性能好的生產菌株；

2、將菌株接種于瓊脂培養基上，培養斜面菌種；

3、取斜面菌種，接于1000ml的三角燒瓶中，三角燒瓶中按水和原料的比例加入水500ml葡萄糖0.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸鎂0.1％配制培養液，37℃培養13-17h，經檢查無雜菌污染，生長良好，備用；

4、種子罐培養液(原料同上③)120℃滅菌30min，再冷卻37℃，將三角燒瓶菌種按種子罐培養液5％的比例接入，37℃培養13-17h，經檢查長勢好，無污染，備用；

5、發酵罐培養液(原料同上③)120℃再依次滅菌、冷卻37℃，將種子罐菌種按發酵罐培養液10％的比例接入，維持通氣量550L/min，37℃培養41-48h；

6、發酵液升溫至80℃恒溫滅活10min；

7、然后按發酵液重量的0.3％加入活性炭，吸附1h，過濾脫碳和除去菌體；

8、過濾液攪拌下加入1％的CPB水溶液(常用液體試劑配比)，靜置收集沉淀，除去上清液；

9、沉淀加入發酵液等體積的0.4mol/L的氯化鈉溶液，攪拌解離6h；

10、解離液通過離子交換脫色；

11、脫色液經膜分離濃縮和純化；

12、濃縮液加入三倍體積的95(產品常規濃度)％乙醇，析出沉淀；

13、沉淀經干燥得透明質酸成品。

所述的鏈球菌為：獸疫鏈球菌、馬鏈球菌、類馬鏈球菌(中科院微生物儲藏所或市場上購置)。

本發明與現有技術相比，具有以下優點和效果：

1、采用本發明生產方法，有效地解決了傳統工藝帶來的環境污染和安全隱患。

2、采用本發明脫離了對原材料生產的嚴重依賴，不因原材料缺少而帶來的生產不穩定。

3、采用本發明的膜分離技術，對液態物料進行分離、濃縮和純化，均在常溫下操作、無相態變化、高效節能，并且生產過程中不產生污染。

4、本發明采用離子交換進行脫色，既避免了有害物質在產品中的殘留，又能保證產品的天然潔白度。

5、本發明生產周期短、成本低、不產生任何有毒有害物質，安全，無毒副作用，可廣泛用于化妝品、食品、藥品等領域。

本發明經多次試驗得到如下數據：

項目?????????????化妝品級?????????食品級???????????醫藥級

外觀白???????????色粉末???????????白色粉末?????????白色粉末

分子量???????????1.6×10⁶?????????1.6×10⁶?????????1.6×10⁶

蛋白質???????????≤0.1％??????????≤0.1％??????????≤0.05％

干燥失重?????????＜10％???????????＜10％???????????＜10％

熾燒殘渣?????????＜20％???????????＜20％???????????＜20％