[發明專利]一種檢測樣品中是否含有重金屬銅離子的方法及其專用試劑盒

無效

• 申請號: 201010253926.3
• 申請日: 2010-08-13
• 公開（公告）號: CN101968481A
• 公開（公告）日: 2011-02-09
• 發明（設計）人: 王保民;趙洪偉;南鐵貴;譚桂玉;曹振;高巍;王敏;孫碩;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/566;C07K16/44;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種檢測樣品中是否含有重金屬銅離子的方法及其專用試劑盒。

背景技術

重金屬是環境與農產品中的重要污染物質，可以通過食物鏈在動物及人的體內富集，對人類健康會帶來嚴重的危害。銅是生命體生長所必須的微量元素之一，但是高濃度的銅會對生命體產生毒害作用。

目前，重金屬銅的分析方法主要有原子吸收光譜法、電感耦合等離子體發射光/質譜法、X-射線熒光光譜法、電位溶出分析法以及近幾年發展的生物傳感器檢測法等。但是用這幾種方法檢測銅離子需要昂貴的儀器設備，檢測費用高，耗時，不能用于現場快速檢測。與儀器分析法相比，酶聯免疫吸附測定法(ELISA)具有快速、簡便、實時、易于進行現場檢測、樣品前處理簡單、靈敏度高、選擇性強、適合于高通量分析等優點，而且還能大幅度降低檢測成本。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種用于檢測樣品中是否含有重金屬的試劑盒。

本發明所提供的用于檢測樣品中是否含有重金屬的試劑盒，包括包被原、抗待檢重金屬的抗體；所述包被原與抗待檢重金屬的抗體結合，且所述包被原與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力小于所述待檢重金屬與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力。

上述任一所述試劑盒中，所述包被原為如下絡合物：螯合劑與載體蛋白通過共價鍵連接形成的偶聯物再與金屬離子Ⅰ通過配位鍵連接形成的絡合物；所述金屬離子Ⅰ為除了所述待檢重金屬外的其余金屬中的任一種，且所述金屬離子Ⅰ與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力小于所述待檢重金屬與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力；

所述共價鍵是所述螯合劑上的氨基基團與所述載體蛋白上的酚基基團形成的；所述配位鍵是所述金屬離子Ⅰ與所述偶聯物中的螯合劑上的乙二胺四乙酸形成的。

上述任一所述試劑盒中，所述包被原是按照如下方法制備得到的：

(1)將螯合劑重氮化，得到重氮化的螯合劑；

(2)將載體蛋白與所述重氮化的螯合劑混合，進行偶聯反應，得到載體蛋白與所述重氮化的螯合劑的偶聯物；

(3)將所述金屬離子Ⅰ的溶液與所述偶聯物混合，進行絡合反應，得到所述包被原；

上述任一所述試劑盒中，所述重氮化的方法包括如下步驟：將所述螯合劑溶于酸的水溶液中，再向其中加入亞硝酸鹽，進行重氮化反應，得到所述重氮化的螯合劑；所述重氮化反應的條件包括：溫度為0-5℃、避光和時間為15min；所述溫度優選為0℃或4℃；所述螯合劑、酸和亞硝酸鹽的配比為4mg∶2×10^-3mol∶1.2×10^-4mol；

上述任一所述試劑盒中，所述偶聯反應的條件包括：溫度為4℃-10℃或4℃，pH值為8.5-9.0或8.5，反應時間為4h-24h或4h；所述重氮化的螯合劑與所述載體蛋白的投料摩爾比為10∶1；

上述任一所述試劑盒中，所述絡合反應的條件包括：溫度為25℃、pH值為7.5和時間為12h；所述偶聯物與所述金屬離子Ⅰ的投料摩爾比為1∶20。

上述任一所述試劑盒中，所述試劑盒中包括包被緩沖液、洗滌液、樣品稀釋液、標準品溶液和酶標抗抗體；

上述任一所述試劑盒中，所述標準品為EDTA與所述待檢重金屬的螯合物。

上述任一所述試劑盒中，所述標準品是按照如下方法制備得到的：

(1)將每29.3mg?EDTA溶解于去離子水中，調節pH至8.0，得到溶液Ⅰ；

(2)將13.5mg待檢重金屬可溶性鹽溶解于去離子水中，并逐滴加入到所述溶液Ⅰ中，磁力攪拌反應12小時，再將溶液定容至6.4mL，得到EDTA與待檢重金屬的螯合物。

上述任一所述試劑盒中，所述標準品溶液中待檢重金屬離子濃度為20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.31ng/mL、0.156ng/mL和0.078ng/mL。

上述任一所述試劑盒中，所述包被緩沖液為0.05M、pH9.6的碳酸鹽緩沖液；

上述任一所述試劑盒中，每1升洗滌液按照如下方法配制：將8.0g?NaCl、0.2gKH₂PO₄、2.96g?Na₂HPO₄·12H₂O、1mLTween-20溶于水中，并用水補足至1L；

上述任一所述試劑盒中，樣品稀釋液按照如下方法配制：將1mL吐溫20和1g明膠溶于1L?PBS緩沖液中，得到樣品稀釋液；