[發明專利]一種檢測樣品中是否含有重金屬銅離子的方法及其專用試劑盒

無效

• 申請號: 201010253926.3
• 申請日: 2010-08-13
• 公開（公告）號: CN101968481A
• 公開（公告）日: 2011-02-09
• 發明（設計）人: 王保民;趙洪偉;南鐵貴;譚桂玉;曹振;高巍;王敏;孫碩;李召虎
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/566;C07K16/44;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種用于檢測樣品中是否含有重金屬的試劑盒，包括包被原、抗待檢重金屬的抗體；所述包被原與抗待檢重金屬的抗體結合，且所述包被原與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力小于所述待檢重金屬與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述包被原為如下絡合物：螯合劑與載體蛋白通過共價鍵連接形成的偶聯物再與金屬離子Ⅰ通過配位鍵連接形成的絡合物；所述金屬離子Ⅰ為除了所述待檢重金屬外的其余金屬中的任一種，且所述金屬離子Ⅰ與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力小于所述待檢重金屬與所述抗待檢重金屬的抗體的親和力。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述包被原是按照包括如下步驟的方法制備得到的：

(1)將螯合劑重氮化，得到重氮化的螯合劑；

(2)將載體蛋白與所述重氮化的螯合劑混合，進行偶聯反應，得到載體蛋白與所述重氮化的螯合劑的偶聯物；

(3)將所述金屬離子Ⅰ的溶液與所述偶聯物混合，進行絡合反應，得到所述包被原；

所述重氮化的方法包括如下步驟：將所述螯合劑溶于酸的水溶液中，再向其中加入亞硝酸鹽，進行重氮化反應，得到所述重氮化的螯合劑；所述重氮化反應的條件包括：溫度為0-5℃、避光和時間為15min；所述溫度優選為0℃或4℃；所述螯合劑、酸和亞硝酸鹽的配比為4mg∶2×10^-3mol∶1.2×10^-4mol；

所述偶聯反應的條件包括：溫度為4℃-10℃或4℃，pH值為8.5-9.0或8.5，反應時間為4h-24h或4h；所述重氮化的螯合劑與所述載體蛋白的投料摩爾比為10∶1；

所述絡合反應的條件包括：溫度為25℃、pH值為7.5和時間為12h；所述偶聯物與所述金屬離子Ⅰ的投料摩爾比為1∶20。

4.根據權利要求1-3中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包括包被緩沖液、洗滌液、樣品稀釋液、標準品溶液和酶標抗抗體；

所述標準品為EDTA與所述待檢重金屬的螯合物。

5.根據權利要求1-4中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述標準品是按照如下方法制備得到的：

(1)將每29.3mg?EDTA溶解于去離子水中，調節pH至8.0，得到溶液Ⅰ；

(2)將13.5mg待檢重金屬可溶性鹽溶解于去離子水中，并逐滴加入到所述溶液Ⅰ中，磁力攪拌反應12小時，再將溶液定容至6.4mL，得到EDTA與待檢重金屬的螯合物。

6.根據權利要求1-5中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述標準品溶液中待檢重金屬離子濃度為20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.31ng/mL、0.156ng/mL和0.078ng/mL。

7.根據權利要求1-6中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述包被緩沖液為0.05M、pH9.6的碳酸鹽緩沖液；

每1升洗滌液按照如下方法配制：將8.0g?NaCl、0.2g?KH₂PO₄、2.96g?Na₂HPO₄·12H₂O、1mLTween-20溶于水中，并用水補足至1L；

樣品稀釋液按照如下方法配制：將1mL吐溫20和1g明膠溶于1L?PBS緩沖液中，得到樣品稀釋液；

所述抗待檢重金屬的抗體為抗待檢重金屬的單克隆抗體或多克隆抗體；

所述載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、血藍蛋白或卵清白蛋白；

所述酶標抗抗體為辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠抗體。

8.根據權利要求1-7中任一所述的試劑盒，其特征在于：所述待檢重金屬為銅，所述包被原中的金屬為鈷，所述標準品中的金屬為銅，所述抗銅的單克隆抗體為由保藏編號為CGMCC?No.3987的雜交瘤細胞株Cu-EDTA?6A9分泌得到的，所述螯合劑為對氨基芐基乙二胺四乙酸。

9.一種檢測樣品中是否含有重金屬的方法，是用權利要求1-8中任一所述試劑盒對待測樣品進行檢測。

10.保藏號為CGMCC?No.3987的雜交瘤細胞株Cu-EDTA?6A9產生的抗金屬銅的單克隆抗體；

保藏號為CGMCC?No.3987的雜交瘤細胞株Cu-EDTA?6A9。