[發明專利]一種草莓莖尖組培專用培養基及其生產脫毒苗的方法

無效

• 申請號: 201010252871.4
• 申請日: 2010-08-13
• 公開（公告）號: CN101946702A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 陳懷勐;郭仰東;王立府;路河;高麗
• 申請（專利權）人: 北京金六環農業園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 史雙元

技術領域

本發明屬于組培育苗技術領域，具體說涉及一種草莓莖尖組培專用培養基及其生產脫毒苗的方法。

背景技術

草莓(Fragaria?ananassa?Ducde)是薔薇科草莓屬宿根性多年生常綠草本植物，屬于多倍體，是一種靠匍匐莖進行無性繁殖的作物，傳統種苗培育的方法是采用匍匐莖繁殖的無性繁殖方式，效率較低，不利于優良品種的推廣，而且極易感染病毒。我國已鑒定明確的草莓病毒有四種，即草莓斑駁病毒(SMOV)、草莓輕型黃邊病毒(SMYEV)、草莓皺縮病毒(SCRV)和草莓鑲脈病毒(SVBV)。種苗普遍感染病毒是草莓生產中的瓶頸問題，感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓長勢弱、抗性差、產量明顯下降，果品品質與商品性狀變劣，嚴重影響了這一名優種植業的穩步發展。目前，解決草莓的病毒病主要是通過草莓脫毒組培技術，即通過花藥組織培養、微莖尖組織培養等技術脫去病毒病原獲得無毒草莓再生植株，使草莓種苗恢復品種原種優良種性，以達到優質、高產之目的。草莓的莖尖培養是獲得無病毒植株的重要途徑。在莖尖培養過程中，應根據外植體來源和生長狀況不同，對培養基中激素濃度的大小及相互之間的配比進行調整，從而得到某種材料及相應外植體的最適組培方法。

紅顏草莓(又稱紅頰草莓，日本99號，紅臉頰)，是目前最優秀的日本系列草莓。紅顏草莓生長勢強，植株較高(25厘米)，結果株徑大，分生新莖能力中等，葉片大而厚，葉柄淺綠色，基部葉鞘略呈紅色，匍匐莖粗，抽生能力中等，花序梗粗，分枝處著生一大一小兩完全葉。每個花序4至5朵花，花瓣易落，不污染果實。該品種果個較大，最大可達100多克，一般30至60克。果實圓錐形，種子黃而微綠，稍凹入果面，果肉橙紅色，質密多汁，香味濃香，糖度高，風味極佳，果皮紅色，富有光澤，韌性強，果實硬度大，耐貯運；但紅顏草莓育苗不易，初代培養脫毒效果差，污染及玻璃化問題，初代莖尖萌發率和繁育系數低，移栽成活率不高，繼代快繁培養過程中，經常會出現一種生長異常的試管苗即玻璃苗。表現出植株矮小、葉色淺且皺縮，呈水晶樣透明或半透明水漬狀，莖葉變脆硬，易碎，嚴重影響繁殖率，給生產造成很大損失。

發明內容

本發明的目的在于提供一種莖尖組培專用培養基。包括初代培養基、繼代培養基和生根培養基。

本發明的另一目的在于提供一種草莓莖尖組織培養生產脫毒苗的方法。

一種草莓莖尖組織初代培養基，該初代培養基是含有濃度為0.2～0.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(BA)和濃度為0.1-0.2mg/L的萘乙酸(NAA)的MS培養基，也就是說是以MS培養基為基礎培養基，然后向MS培養基中添加濃度為0.2～0.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(BA)和濃度為0.1-0.2mg/L的萘乙酸(NAA)；

上述初代培養基中還包含0.02mg/L的赤霉素(GA₃)或/和0.3mg/L的激動素(KT)；

上述初代培養基中0.1-0.2mg/L的萘乙酸(NAA)可以用0.2mg/L的吲哚乙酸(IAA)來代替。

一種草莓莖尖組織繼代培養基，該繼代培養基是含有濃度為0.2～0.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(BA)的MS培養基；

上述繼代培養基中還包括0.2mg/L的吲哚乙酸(IAA)。

一種草莓莖尖組織生根培養基，該生根培養基為1/2MS；

上述生根培養基還包含0.1～0.3mg/L的吲哚丁酸(IBA)、0.5～1.0mg/L的吲哚乙酸(IAA)或0.01～0.1mg/L的萘乙酸(NAA)。

一種草莓莖尖組織培養生產脫毒苗的方法，包括以下操作步驟：

(1)熱處理：將無病健壯的日本紅顏草莓苗放入人工氣候箱中，一天中16小時在40～41℃、有光照的條件下處理，其余18小時在35℃、黑暗條件下處理，持續變溫處理4-5周；

(2)材料的采集及消毒：取步驟(1)熱處理后的草莓苗匍匐莖頂芽，進行滅菌消毒處理；

(3)莖尖初代培養：在解剖鏡下從滅菌消毒后的頂芽上切取0.2-0.5mm大小的莖尖生長點，接種到上述的初代培養基中，暗培養5-7天后，光照培養35-45天至分化出叢生芽，其中，光照強度為1500-2000lx，光照時間為10h/d，溫度25±2℃；

(4)繼代培養：將初代培養分化出來的叢生芽轉接到上述繼代培養基中培養25-35天，光照強度為2000-3000lx，光照時間為14h/d，溫度25±2℃，繼代培養代數控制在5-8代；

(5)生根培養：將經繼代培養的草莓苗轉到上述生根培養基中促使其生根，生根培養20-35天；