[發明專利]淡紫擬青霉抑制象耳豆根結線蟲的測定方法

無效

• 申請號: 201010252116.6
• 申請日: 2010-08-12
• 公開（公告）號: CN102373260A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 卓侃;史懷;周先治;黃素芳
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所;福建省農業科學院農業生物資源研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212
• 代理人: 翁素華

1.一種淡紫擬青霉抑制象耳豆根結線蟲卵孵化的測定方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)挑取純化后的象耳豆根結線蟲的卵囊，放入帶蓋的10mL離心管內，加入5mL0.5％NaClO，用力振蕩3min，迅速將其通過雙層篩，上層篩孔徑為250μm，下層篩孔徑為38μm，接著用無菌水收集沖洗下層篩中的卵粒；

(2)單孢分離的淡紫擬青霉菌株在25℃下生長7d后，用直徑為6mm的打孔器切取菌落邊緣的菌塊，將菌塊置于PDA培養基平板中央，在菌塊周圍斜插上3塊載玻片，每塊載玻片上放置約50粒卵；設置一個對照，該對照是直接把卵粒放置在載玻片上后，置于PDA培養基中；各重復3次，然后把它們均置于25℃培養箱中；

(3)分別在3d、7d和10d后取出載玻片鏡檢卵的孵化數，并通過計算卵的相對抑制率，同時每天觀察卵被菌寄生的情況。

2.一種淡紫擬青霉抑制象耳豆根結線蟲2齡幼蟲的測定方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)挑取象耳豆根結線蟲卵囊置于25℃培養箱中，孵化獲得2齡幼蟲；

(2)單孢分離的淡紫擬青霉菌株在25℃下生長7d后，用直徑為6mm的打孔器切取菌落邊緣的菌塊，將菌塊移入裝有50mLPDB培養液的250mL三角瓶中，然后置于溫度為25℃、轉速為120rpm的搖床中培養7d，將培養所得真菌粗提液先經濾紙過濾第一次，濾去菌絲，接著再使用孔徑為0.2μm的微孔濾膜過濾第一次的濾液，最后獲得的第二次濾液即為所需的淡紫擬青霉培養濾液；設置一對照，該對照用未接菌的，且于溫度25℃、轉速120rpm搖床中培養7d的PDB培養液；

(3)取1mL步驟(2)中的培養濾液，加入0.5mL象耳豆根結線蟲2齡幼蟲懸浮液，該懸浮液濃度約為200條2齡幼蟲/mL，放入25℃培養箱培養24h，24h后取出于解剖鏡下采用針刺法觀察線蟲的活動性，不活動的線蟲即被擊倒的，將不活動線蟲挑入清水中，24h后觀察其死亡率，不動者即為死亡；

其中，步驟(2)中的PDB培養液的組分為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。