[發明專利]用于免疫測定的增強標記綴合物

無效

• 申請號: 201010250077.6
• 申請日: 2010-07-02
• 公開（公告）號: CN101957369A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: I·門德爾-哈特威格;G·倫德斯特倫
• 申請（專利權）人: 阿米克股份公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李志東;郭文潔

技術領域

本發明涉及免疫測定領域，特別是由至少一個載體和至少一個連接體組成的，用于診斷測定的被標記的綴合物。

背景技術

許多測定使用了被標記的試劑，也被稱為檢測綴合物，提供的每種標記使得可以定性或定量的測定每種特定試劑的存在。標記的重要原理是基于顏色、發光、如化學發光和熒光、放射性、以及磁性。通常優選熒光標記，因為此標記可以并且易于快速測光讀數。放射性標記有可以給出定性和定量讀數的優勢，但最近和當今的趨勢通常偏向非放射性標記。

有三個重要因素決定使用檢測綴合物的測定的靈敏度。這些因素是連接到試劑，如抗體上的標記物的數量；檢測綴合物的親和力，如每個綴合物的抗體數量；以及檢測綴合物在結合點的濃度，即可能發生的連接事件的數量。已經使用摻入或標記了大量標記物的聚合顆粒來增強靈敏度。

已知的增加標記的方法是將更多標記物連接到顆粒上，并將連接體，如抗體連接到這些被標記的顆粒上。

合成的聚合物顆粒，如聚苯乙烯顆粒，有不同的大小可供使用。現在使用的被摻入聚苯乙烯顆粒的熒光基團或發色基團直徑最通常是大于100nm。

例如能通過使用適合的、展示出可以標記的氨基的蛋白包被顆粒的方法來改進向顆粒連接標記物。給出以下的例子：甲狀腺球蛋白、牛血清白蛋白、血青蛋白、肌漿球蛋白、脫鐵鐵蛋白、過氧化氫酶、一系列有不同賴氨酸/氨基酸比率的聚賴氨酸共聚物、α-2-巨球蛋白、亮氨酸氨肽酶、重酶解肌球蛋白和組蛋白。

這種方法在許多情況下是成功的，但也引起了不精確性的問題。后者的另一個問題是由于測定中可以加入的顆粒數量有限，結合點處的連接事件數量少。在實際應用中，在連接到被捕獲在固相上的抗原上時，一個顆粒標記被認為等于一個連接體，如抗體。進一步的，流動測定時的強剪應力也可能影響連接和形成的夾心結構的穩定性。

US?5,891,741涉及與右旋糖苷交聯的，抗體-藻膽蛋白綴合物，綴合物中每個右旋糖苷分子包含多至12個藻蛋蛋白。公開的內容提及術語“單分散性”，但其僅是與藻膽蛋白家族中的一個成員，藻紅蛋白有關。US?5,891,741中使用的載體是右旋糖苷，如前所述是多分散性的。

CA?1330061公開了一種包括與載體顆粒相連的抗生物素蛋白或鏈霉親和素的檢測綴合物，其中載體顆粒表面包含多于15個能用適合操作的標記物獨立標記的氨基。載體顆粒可以與抗生物素蛋白或鏈霉親和素相連形成檢測綴合物。

US?20050026305A1涉及大小分布窄的多分散性氨基右旋糖苷聚合物分子，以及其作為流式細胞術的細胞標記試劑的用途。

出于實用性原因，當使用已有技術中的，如CA?1330061和US20050026305A1中舉出的被標記的顆粒時，顆粒在溶液中的濃度一定會受到限制。

因此，已有技術中的一個問題是怎樣提供一種在更高的濃度下可用的綴合物。

Qin等(Anal?Chem.2001?Apr?1；73(7)：1521-9)公開了兩種用作高靈敏度免疫測定通用檢測試劑的，基于鏈霉親和素的高熒光檢測綴合物。直接綴合物是通過將鏈霉親和素共價連接到被大量銪螯合物標記的聚(谷氨酸：賴氨酸)上制備而成；而間接綴合物的制備是首先將牛血清白蛋白(BSA)綴合到被大量銪螯合物標記的聚(谷氨酸：賴氨酸)上，隨后進一步將鏈霉親和素連接到BSA-聚(谷氨酸：賴氨酸)-銪螯合物綴合物上。直接綴合物和間接綴合物都被用于構建高靈敏度的時間分辨前列腺特異性抗原(PSA)熒光測定。使用直接綴合物的測定靈敏度是使用間接綴合物的測定的1.5倍。當使用45微升樣品體積時，使用直接綴合物得到了0.001微克/L的檢出限。然而由于聚合物的準確大小難以控制，因此，Qin等的綴合物并不適合實際使用。在實踐中，聚(谷氨酸：賴氨酸)聚合物分子量分布在很大的范圍內。

現有技術的另一個問題是使用多分散聚合物的效果。進一步的問題還有每個檢測綴合物連接體數量少和連接親和力低。

US?20060008206涉及一種波導板及其生產過程，和包括這樣的波導板的微量滴定板。

WO?2008/0733222公開了間接側向流動夾心測定，其中目標分析物被連接到包含綴合對的第一成員的分析物特異性試劑上，形成復合物，復合物聯系并連接包括所述綴合對的另一成員的，一個有色的顆粒狀標記物，形成第二復合物。通過固定的被分析物特異性捕獲試劑捕獲包含被分析物的第二復合物，結果形成了可以被檢測到的，被標記的固定夾心復合物。

發明簡述

本發明的目的是消除至少一部分現有技術的缺點并提供一種改良的綴合物。