[發明專利]預防鴨病毒性肝炎的滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201010247306.9
• 申請日: 2010-08-06
• 公開（公告）號: CN101948809A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 劉文軍;周遠成;孫蕾;李晶
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02;A61K39/29;A61P31/14;A61P1/16;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明屬于獸醫生物制品技術領域，具體涉及預防鴨病毒性肝炎的滅活疫苗(細胞苗)及其制備方法。

背景技術

我國是世界上第一水禽生產大國，具有得天獨厚的水域、地理資源優勢。養鴨業是我國水禽養殖業的重要組成部分，在我國的農業經濟中占有著非常重要的地位，然而鴨病的肆虐不但制約著我國養殖業向規模化、集約化方向的邁進，而且影響著我國禽類產品的進出口等國際化多邊貿易的發展，同時會給國家和地區帶來巨大的社會、經濟和人類生命財產損失。鴨病毒性肝炎是鴨群的常見疾病，對雛鴨有著較大的危害。鴨病毒性肝炎的防控直接影響著我國養鴨業的發展，一直以來都是我國畜牧業生產所關注的重中之重。

鴨病毒性肝炎(Duck?virus?hepatitis，DVH)是由鴨甲型肝炎病毒(Duck?hepatitis?A?virus，DHAV)引起的一種雛鴨的急性高度致死性傳染病，主要侵害4周以內的雛鴨，特別是1周以下的雛鴨最易感染，死亡率較高。鴨病毒性肝炎為小RNA病毒科Avihepatovirus病毒屬，無囊膜不分節段的正鏈RNA病毒，無血凝性，對酸、熱有較強抵抗力。該病毒RNA全長7729～7799，只有一個開放閱讀框，翻譯產生一個含2254aa的多聚蛋白。因DHAV抗原性差異，DHAV可分為三個基因型，分別為DHAV-1，DHAV-2(Taiwan)和DHAV-3(Korea)，三個亞型之間無血清學交叉反應，目前在我國流行的主要為DHAV-1和DHAV-2。

目前鴨病毒性肝炎在世界多數養鴨國家均有發生和流行，我國許多養鴨的省市均有該病的流行。對鴨病毒性肝炎的防控中，目前疫苗己研制成三種：氫氧化鋁DHV雞胚化弱毒苗(組織苗)、氫氧化鋁DHV雞胚化弱毒滅活苗(組織苗)及氫氧化鋁DHV雞胚化強毒滅活苗(組織苗)。從病原入手，進一步研究分子致病機理和病毒變異機理，開發相應疫苗是防控該病的關鍵。

發明內容

本發明的目的是提供一種預防鴨病毒性肝炎的滅活疫苗及其制備方法。

本發明提供了鴨甲型肝炎病毒1型(Duck?hepatitis?A?virus?type?1)DHAV-SD株，CGMCC?No.3746。鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC?No.3746是2009年4月，劉文軍、周遠成在山東省濰坊市鴨場的發病鴨體內分離獲得的一株鴨病毒性肝炎I型病毒(DHAV-1)，已于2010年4月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏號為CGMCCNo.3746。

鴨甲型肝炎病毒1型又稱鴨肝炎病毒1型。

本發明保護鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC?No.3746在制備1型鴨病毒性肝炎疫苗(細胞苗)中的應用。

本發明還保護將鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC?No.3746滅活得到的1型鴨病毒性肝炎疫苗(細胞苗)。

本發明還保護一種制備DHAV-SD株病毒液的方法，包括如下步驟：將鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC?No.3746在宿主細胞中進行培養后破碎細胞，得到的上清即為病毒液；所述宿主細胞為BHK21細胞或DF-1細胞。

所述將鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC?No.3746在宿主細胞中進行培養后破碎細胞，收集上清液的方法可包括如下步驟：

①將鴨甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC?No.3746接種所述宿主細胞，進行培養后通過凍融破碎細胞，收取上清，即為生產用種毒；②將生產用種毒接種所述宿主細胞，進行培養后通過凍融破碎細胞，收取上清，即為制苗用種毒；③將制苗用種毒接種所述宿主細胞，進行培養后通過凍融破碎細胞，收集上清液。

所述步驟①、步驟②和步驟③中：接種所述宿主細胞時MOI均可為0.001，培養時間均可為48～72小時；所述步驟①、步驟②和步驟③中：培養時間優選為48小時；所述步驟③中，可通過5000rpm(Thermo?legend?RT離心機，角轉子#3332)離心30～40min收集上清液。

所述宿主細胞為BHK21細胞時，在所述接種前可先進行如下擴增培養：