[發(fā)明專利]一種無(wú)需提取動(dòng)物組織DNA的直接PCR方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010245529.1
• 申請(qǐng)日: 2010-08-04
• 公開（公告）號(hào): CN102344919A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳常信;李紅偉;徐海岳;趙春江
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

1.一種無(wú)需提取動(dòng)物組織DNA的直接PCR方法，其特征在于，以動(dòng)物組織消化液為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述動(dòng)物組織消化液按如下步驟獲得：將動(dòng)物組織與組織裂解液混合，37～55℃溫育25～30min，95℃變性5min。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的PCR方法，其特征在于，所述動(dòng)物組織消化液按如下步驟獲得：動(dòng)物組織與組織裂解液混合，55℃溫育30min，95℃變性5min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的PCR方法，其特征在于，所述組織裂解液由Tris-Cl、EDTA、蛋白酶K和NaCl組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR方法，其特征在于，所述Tris-Cl的濃度為10～100mM，pH8.0，所述的EDTA濃度為1～4mM，pH8.0，所述的蛋白酶K的濃度為100～200μg/ml，所述的NaCl的濃度為0～0.8M。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的PCR方法，其特征在于，所述的Tris-Cl的濃度為10mM，所述的EDTA濃度為2mM，所述的蛋白酶K的濃度為200μg/ml，所述的NaCl濃度為0.2M。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述的動(dòng)物組織選自耳組織、血液或毛發(fā)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的PCR方法，其特征在于，所述的毛發(fā)帶有毛囊。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述的PCR的反應(yīng)體系如下：

終濃度為250μM?dNTP，10mMTris-Cl，pH8.3，50mM?KCl，1.5mMMgCl₂，2pM上游引物，2pM下游引物，2μl組織消化液，1U?Taq?DNA聚合酶，用ddH₂O補(bǔ)足至20μl。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR方法，其特征在于，所述PCR的反應(yīng)條件如下：

94℃預(yù)變性4min，94℃變性30s，61℃復(fù)性30s，72℃延伸20～40s，40個(gè)循環(huán)，然后72℃延伸7min，最后16℃保溫。