[發明專利]軟骨細胞仿生培養模型及其制備方法有效
| 申請號： | 201010245254.1 | 申請日： | 2010-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN102344905A | 公開（公告）日： | 2012-02-08 |
| 發明（設計）人： | 葛子鋼 | 申請（專利權）人： | 北京大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 張慶敏;王加嶺 |
| 地址： | 100871*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 軟骨 細胞 仿生 培養 模型 及其 制備 方法 | ||
1.一種軟骨細胞仿生培養模型，其特征在于，通過下述方法制備而成：
1)制取中心帶有鉆孔的表層軟骨骨塊模型，用PBS清洗，用γ射線消毒；
2)將1.1％-1.3％海藻酸鈉加至細胞培養板各孔，然后將步驟1得到的骨塊模型放入細胞培養板各孔；
3)向孔中和骨塊模型周圍加入0.1-0.15MCaCl2溶液，使海藻酸鈉溶液凝固；
4)吸出步驟3加入的CaCl2溶液，用細胞培養液潤洗。
2.根據權利要求1所述的仿生培養模型，其特征在于，所述步驟1中，表層軟骨取自于牛、豬馬或羊。
3.根據權利要求1所述的仿生培養模型，其特征在于，所述步驟2中，將1.2％海藻酸鈉加至細胞培養板。
4.根據權利要求1所述的仿生培養模型，其特征在于，所述步驟3中，向孔中和骨塊模型周圍加入0.1MCaCl2溶液。
5.根據權利要求1所述的仿生培養模型，其特征在于，所述步驟3中，凝固后，在4℃冰箱放置2h。
6.根據權利要求1所述的仿生培養模型，其特征在于，步驟4中，所述的細胞培養液通過下述步驟制成：向滅菌后的培養瓶中加入180mL?DMEM原液，20mL融化的FBS，再加入1000X的PS?200μL，整個過程保持無菌環境。
7.制備權利要求1-6任一項所述軟骨細胞仿生培養模型的方法，包括下述步驟：
1)制取中心帶有鉆孔的表層軟骨骨塊模型，用PBS清洗，用γ射線消毒；
2)將1.1-1.3％海藻酸鈉加至細胞培養板，然后將步驟1得到的骨塊模型放入細胞培養板各孔；
3)向孔中和骨塊模型周圍加入0.1-0.15MCaCl2溶液，使其凝固；
4)吸出步驟3加入的CaCl2溶液，用細胞培養液潤洗。
8.權利要求1-6任一項所述的仿生培養模型在培養軟骨細胞中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，包括下述步驟：
1)向培養模型中各孔加入原代PⅠ代軟骨細胞；
2)在37℃，5％CO2培養箱中培養1h使細胞貼壁；
3)待細胞貼壁后，向細胞培養板的各孔中加入權利要求6所述的細胞培養液，使其沒過培養模型上層軟骨，培養。
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