[發明專利]一種重組蛋白A基因及其表達產物的制備方法和用途

有效

• 申請號: 201010245004.8
• 申請日: 2007-03-14
• 公開（公告）號: CN101935665A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 談珉;胡輝;郭亞軍
• 申請（專利權）人: 上海國健生物技術研究院
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C07K14/31;C07K1/22;G01N33/53
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一種重組蛋白A親和層析介質的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)通過化學合成的方法設計合成重組蛋白A基因單體，5‘端Ala-Asp突變成Val-Asp，以形成AccI酶切位點，各重組蛋白A基因單體間以AccI酶切位點相連，第一個重組蛋白A基因單體前端加入與表達載體相連的NcoI酶切位點，6個His和EK酶切位點，最后一個重組蛋白A基因單體末端加入中止密碼子TAA和與表達載體pET32a相連的BamH?I酶切位點；

(2)將步驟(1)的重組蛋白A基因單體酶切后接入載體pET32a的相應酶切位點之間，再以Acc?I內切酶酶切，連接成包含3個串連重組蛋白A基因單體的重組蛋白A基因表達載體pET32a-P；

(3)將步驟(2)的表達載體pET32a-P轉化大腸桿菌BL21/DE3，篩選、酶切，獲得重組轉化子BL21/pET32a；

(4)將步驟(3)的菌株BL21/pET32a進行培養發酵，使其高效表達重組蛋白A，再收集菌體，經分離、純化得到重組蛋白A產品；

(5)用環氧氯丙烷、氫氧化鈉與瓊脂糖或葡聚糖凝膠在水介質中進行反應，反應產物與步驟(4)獲得的重組蛋白A在5-25℃溫度下反應15-20小時，反應完后清洗再抽干，獲得重組蛋白A凝膠。

如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)瓊脂糖凝膠為5％的交聯瓊脂糖凝膠。

如權利要求1-2中任一項所述的制備方法獲得的重組蛋白A，具有SEQ?IDNO.1所示的氨基酸序列。

如權利要求3所述的重組蛋白A，具有SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。

如權利要求1-2中任一項所述的制備方法獲得的重組蛋白A親和層析介質，其中重組蛋白A具有SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列。

如權利要求5所述的重組蛋白A親和層析介質，其中重組蛋白A具有SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。

如權利要求1-2中任一項所述的制備方法獲得的重組蛋白A親和層析介質的用途，其特征在于，所述重組蛋白A親和層析介質用于抗體分離純化。

如權利要求3-4中任一項所述的重組蛋白A的用途，其特征在于，所述重組蛋白A用于抗體檢測。

如權利要求5-6中任一項所述的重組蛋白A親和層析介質的用途，其特征在于，所述重組蛋白A親和層析介質用于抗體分離純化。