[發明專利]一種免疫毒素及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201010245001.4
• 申請日: 2007-04-23
• 公開（公告）號: CN101979593A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 郭亞軍;候盛;寇庚;李晶
• 申請（專利權）人: 上海中信國健藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/395;A61P37/06
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本申請為發明名稱為：一種免疫毒素及其制備方法和用途、申請號為：200710101486.8的中國發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明屬于免疫學領域，具體的說，涉及一種免疫毒素，以及含有這種免疫毒素的載體、轉化的菌株和用途。

背景技術

器官移植是20世紀醫學的重大成就之一，是多種臟器終末性疾病目前唯一的治療手段。僅我國每年新增的肝、腎及心臟功能衰竭患者就達數百萬，其中大部分可通過器官移植延長生命。從供體器官來源來分，器官移植可分為同種同基因移植(如自體移植、孿生子之間的移植)、同種異基因移植、以及異種移植。目前絕大多數臟器移植均為同種異基因移植。由于人體主要組織相容抗原(MHC抗原)的高度多樣性，不可避免地造成供體臟器抗原與受體免疫系統不相容，手術后產生嚴重排斥反應。

急性排斥反應是最常見的一種移植排斥反應，屬于遲發型變態反應的細胞免疫現象，是移植物的HLA抗原刺激受者T淋巴細胞使之分化增殖，產生大量具有特異性的致敏淋巴細胞，可直接殺傷或通過釋放各種淋巴因子殺傷靶細胞，排斥移植物。現認為體液免疫也參與急性排斥反應。組織病理學改變為血管內膜損傷和纖維素樣壞死伴單核細胞浸潤。急性排斥反應經過及時正確的處理，80-90％能被逆轉。

T淋巴細胞是特異性免疫應答反應最重要的功能細胞，在免疫識別、免疫反應啟動、效應階段，以及免疫調節的過程中，無不起著重要的作用。器官移植排斥反應基本上屬于特異性免疫應答反應，移植免疫學研究表明，T細胞是急性移植排斥的主要效應細胞。環孢霉素A、OKT3等現代免疫移植劑及通過廣泛作用于T細胞而發揮抗移植排斥作用。但是，由于這些藥物作用不具有特異性，因而增加了感染和惡性腫瘤發生的幾率，在一定程度上抵消了移植的治療效果。雖然免疫耐受是移植研究的終極目標，但是開發特異性作用于活化T細胞的免疫抑制劑成為移植研究的更現實目標。

研究發現，IL-2是免疫系統中重要的信號分子，其受體表達是同種抗原反應性T細胞活化的關鍵步驟。CD25是IL-2受體的alpha鏈。一般情況下，靜止T細胞和B細胞不表達CD25。但是在發生排斥的病人，外周血T細胞和移植物局部浸潤T細胞表達CD25明顯增加，排斥前和排斥過程中活化的T細胞分泌的游離的IL-2Ra在血清中增加；而且，抗CD25抗體體外可以抑制MHC不匹配淋巴細胞的混合反應及CTL產生。CD25抗體能夠干擾IL-2結合到其高親和受體上，有效地與IL-2競爭，抑制IL-2啟動的T細胞增殖反應，從而選擇性地抑制了免疫應答，防止了同種異體排斥反應。因此，CD25抗體是一種可用于預防器官移植排斥反應的抗體。

然而，單獨使用單抗的治療效果并不理想，人們很快開發出了以單抗或細胞因子為導向部分，與經修飾的毒蛋白相連，對靶細胞進行殺傷作用的免疫毒素。第一代免疫毒素是通過化學偶聯，以二硫鍵將完整的單抗與經過修飾的毒蛋白相連而合成。經化學偶聯的免疫毒素需要單獨制備抗體和毒素，異源性高，毒性強，并且分子量很大(～200kDa)，導致其穿透實體腫瘤的能力很差，從而大大影響了其在腫瘤治療中的應用。第二代的免疫毒素是由完整的單抗與經修飾的或不完整的毒素組成。由于毒素蛋白經修飾毒性降低，動物較容易耐受，但缺陷依然存在。隨著分子生物學技術的發展，重組免疫毒素應用而生，利用DNA重組技術，將異源的scFv基因與經削減的毒素基因融合并克隆到合適的載體上，在大腸桿菌中翻譯出單鏈嵌合蛋白，因此又稱為基因工程免疫毒素。將免疫毒素克隆到適當的表達載體中，在大腸桿菌中得到高效轉錄和翻譯，而且表達周期短，具有操作簡便、成本低廉、易于控制和大規模生產的特點。抗體攜帶毒素導向具有特異抗原的腫瘤組織，與靶細胞上的抗原結合，毒素內化，催化性地使核糖體失活，抑制蛋白合成，殺死細胞。因此，本領域仍需要提供一種高效低毒的免疫毒素。

發明內容

本發明需要解決的第一個技術問題是提供一種分離的多肽，包含抗人單克隆抗體CD25的單鏈抗體ScFv，以及與所述單鏈抗體ScFv偶聯的免疫毒素PE38KDEL，以彌補現有技術的不足。

本發明需要解決的第二個技術問題是提供一種編碼上述多肽的DNA分子。

本發明需要解決的第三個技術問題是提供一種表達上述DNA分子的載體。

本發明需要解決的第四個技術問題是提供一種被上述表達載體轉化的宿主細胞。

本發明需要解決的第五個技術問題是提供一種預防和/或治療T細胞介導的疾病的藥物組合物。

本發明需要解決的第六個技術問題是提供一種多肽在制備預防和/或治療T細胞介導的疾病的藥物中的用途。