[發明專利]一種免疫毒素及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201010245001.4
• 申請日: 2007-04-23
• 公開（公告）號: CN101979593A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 郭亞軍;候盛;寇庚;李晶
• 申請（專利權）人: 上海中信國健藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/395;A61P37/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.免疫毒素CD25-PE38KDEL的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟，

(A)將抗CD25抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區通過連接肽(G4S)3連接起來，構建CD25單鏈抗體ScFv，然后用連接肽將CD25單鏈抗體ScFv與PE38KDEL毒素連接，獲得新的免疫毒素CD25-PE38KDEL序列；

(B)構建表達含有步驟A中所述免疫毒素CD25-PE38KDEL序列的重組質粒，轉化大腸桿菌BL21；

(C)將步驟B中的大腸桿菌BL21誘導表達、菌體破壁、離心收集，獲得免疫毒素CD25-PE38KDEL包涵體；

(D)將步驟C中獲得的免疫毒素CD25-PE38KDEL包涵體于室溫使用8mol/l尿素溶液變性2小時，離心變性液，將收集的離心上清使用濾膜過濾備用；

(E)His-Ni++金屬螯合柱用平衡液平衡，將步驟D中過濾備用的離心上清上樣至His-Ni++金屬螯合柱，上樣完備后再用平衡液平衡，然后將平衡液中的尿素含量緩慢降至0mol/l；和

(F)使用洗脫液洗脫步驟E中的His-Ni++金屬螯合柱，將洗脫收集的蛋白再進行分子篩純化，最終獲得免疫毒素CD25-PE38KDEL蛋白。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟A中所述CD25單鏈抗體ScFv具有重鏈可變區-接頭-輕鏈可變區的結構，其中所述重鏈可變區具有SEQID?NO：1所示的氨基酸序列，所述輕鏈可變區具有SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列，步驟A中所述PE38KDEL毒素具有SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟D中使用的8mol/l尿素溶液的配方為8mol/l尿素、0.1mol/lNaH₂PO₄、0.01mol/l?Tris，pH8.0。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟E中使用的平衡液配方為8mol/l尿素、0.1mol/lNaH₂PO₄、0.01mol/l?Tris、10mmol/l咪唑，pH?8.0。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟F中使用的洗脫液包含0.02mol/l?PB和0.5mol/l咪唑溶液。

6.使用如權利要求1-5中任一項所述的制備方法獲得的免疫毒素CD25-PE38KDEL。

7.一種預防和/或治療T細胞介導的疾病的藥物組合物，其特征在于，所述組合物含有權利要求6所述的免疫毒素CD25-PE38KDEL以及藥學上可接受的載體。

8.權利要求6所述的免疫毒素CD25-PE38KDEL或權利要求7所述的藥物組合物在制備預防和/或治療T細胞介導的疾病的藥物中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，其中所述的T細胞介導疾病為移植排斥反應。