[發明專利]一種檢測喹諾酮類化合物的方法及其專用量子點熒光免疫試劑盒

有效

• 申請號: 201010244086.4
• 申請日: 2010-08-03
• 公開（公告）號: CN101915844A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 吳聰明;沈建忠;張素霞;王戰輝;史為民;程林麗;曹興元;湯樹生
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;C07K16/44;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種檢測喹諾酮類化合物的方法及其專用量子點熒光免疫試劑盒。

背景技術

目前其中獸藥殘留問題是影響動物性食品安全的最主要因素之一，由于動物樣本成分復雜，待測物濃度較低，而且大多數取樣量很少，這就對分析方法的選擇性和靈敏度提出了更高的要求。量子點(Quantum?dot，QD)由于具有獨特的光學和電學性質，使其熒光免疫分析中得到越來越多的應用，作為熒光探針，QD的光學特性比在免疫熒光分析法中經常采用的傳統發色團如羅丹明6G或其它有機染料分子有明顯的優越性QD的激發光譜寬，且連續分布，而發射光譜呈對稱分布且寬度窄，熒光發射波長可通過改變量子點的大小而加以調節，因而不同大小的半導體量子點能被單一波長的光激發而發出不同顏色的熒光。量子點可持續發光，其熒光壽命可達染料分子的100倍以上，比常規的酶聯免疫吸附檢測方法的抗背景干擾能力強，自動化程度高，提高了分析方法的精密度，在獸醫學、醫學、食品分析等方面將會有更廣闊的應用前景。

喹諾酮類化合物(Quinolones，FQs)是一類人工合成的新型抗菌藥，因其抗菌譜廣、抗菌活性強、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性、毒副作用小等特點，廣泛用于人類和動物多種感染性疾病的治療。但該類藥物的長期和廣泛應用會造成畜產品的藥物殘留，并會導致許多細菌對喹諾酮類化合物產生耐藥性，不僅給人類健康帶來極大的危害，同時也影響了畜牧業的發展。因此，我國農業部第235號文件規定其殘留限量為100μg/kg。但由于在畜牧生產中不合理使用現象嚴重，使其在動物性食品中殘留引起生態環境污染和人類健康危害的潛在威脅已倍受關注。動物組織中喹諾酮類化合物殘留的檢測方法主要采用液相色譜法、液相色譜-聯質譜法、酶聯免疫法等。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測喹諾酮類化合物的量子點熒光免疫試劑盒。

本發明提供的檢測喹諾酮類化合物的量子點熒光免疫試劑盒，包括喹諾酮類化合物特異性抗體、包被原和標準品溶液；所述包被原為喹諾酮類化合物半抗原與載體蛋

所述試劑盒還包括濃縮洗滌液、濃縮復溶液、包被緩沖液、封閉液和量子點標記抗抗體；

所述試劑盒由喹諾酮類化合物特異性抗體、包被原、標準品溶液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液、包被緩沖液、封閉液和量子點標記抗抗體組成。

所述喹諾酮類化合物特異性抗體為諾氟沙星單克隆抗體或諾氟沙星多克隆抗體，所述諾氟沙星單克隆抗體是由保藏號為CGMCC?No.3779的對11種喹諾酮類化合物(恩諾沙星、氧氟沙星、環丙沙星、諾氟沙星、達氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、麻保沙星、氨氟沙星、培氟沙星和依諾沙星)都有交叉反應的諾氟沙星單克隆雜交瘤細胞株QNs分泌的抗體。

所述標準品溶液中標準品的濃度為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、22.5μg/L或112.5μg/L，所述標準品為諾氟沙星；

所述濃縮洗滌液是將0.05g疊氮化鈉和100mL濃度為0.02M、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液混合得到溶液；

所述濃縮復溶液是將0.1g牛血清白蛋白和100mL濃度為0.05mol/L、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液混合得到的溶液；

所述包被緩沖液是pH值為9.6的濃度為0.03mol/L的碳酸鹽緩沖液。

所述封閉液是將0.01g疊氮化鈉、10g牛血清白蛋白和100mL濃度為0.03mol/L、pH值為7.4磷酸鹽溶液混合得到的溶液。

所述包被原是按照如下方法制備得到的：

將每70mg載體蛋白溶于1mL?0.01M?PBS緩沖液中，再加入30mgEDC(乙基二甲氨基碳化二亞胺)，25℃攪拌8h，稱為A液；

將40mg喹諾酮類化合物半抗原溶于1mL?0.01M?PBS緩沖液，稱為B液；

將B液加入到A液中，25℃攪拌反應12h，將得到的產物透析，得到所述包被原。

所述喹諾酮化合物半抗原的結構式如式II所示：

所述喹諾酮化合物半抗原是按照如下方法制備得到的：I、將每320mg諾氟沙星與143μL?4-溴丁酸乙酯共溶于100mL二甲基亞砜中，再加入700mg碳酸鉀和30mg碘化鈉，70℃回流提取3天，再靜置1天；II、用乙酸乙酯對步驟I得到的產物進行萃取，取有機相，將有機相干燥，得固體殘留物；III、將固體殘留物加到2mL?1M氫氧化鈉水溶液和500μL乙醇中，70℃反應8h，得到喹諾酮半抗原。