[發明專利]一種檢測喹諾酮類化合物的方法及其專用量子點熒光免疫試劑盒

有效

• 申請號: 201010244086.4
• 申請日: 2010-08-03
• 公開（公告）號: CN101915844A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 吳聰明;沈建忠;張素霞;王戰輝;史為民;程林麗;曹興元;湯樹生
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;C07K16/44;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種檢測喹諾酮類化合物的量子點熒光免疫試劑盒，包括喹諾酮類化合物特異性抗體、包被原和標準品溶液：所述包被原為喹諾酮類化合物半抗原與載體蛋白的偶(式I)。

2.根據權利要求1所述的量子點熒光免疫試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括濃縮洗滌液、濃縮復溶液、包被緩沖液、封閉液和量子點標記抗抗體；

所述試劑盒由喹諾酮類化合物特異性抗體、包被原、標準品溶液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液、包被緩沖液、封閉液和量子點標記抗抗體組成。

3.根據權利要求1或2所述的量子點熒光免疫試劑盒，其特征在于：

所述喹諾酮類化合物特異性抗體為諾氟沙星單克隆抗體或諾氟沙星多克隆抗體，所述諾氟沙星單克隆抗體是由保藏號為CGMCC?No.3779的對11種喹諾酮類化合物(恩諾沙星、氧氟沙星、環丙沙星、諾氟沙星、達氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、麻保沙星、氨氟沙星、培氟沙星和依諾沙星)都有交叉反應的諾氟沙星單克隆雜交瘤細胞株QNs分泌的抗體。

4.根據權利要求1-3中任一所述的量子點熒光免疫試劑盒，其特征在于：

所述標準品溶液中標準品的濃度為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、22.5μg/L或112.5μg/L，所述標準品為諾氟沙星；

所述濃縮洗滌液是將0.05g疊氮化鈉和100mL濃度為0.02M、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液混合得到溶液；

所述濃縮復溶液是將0.1g牛血清白蛋白和100mL濃度為0.05mol/L、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液混合得到的溶液；

所述包被緩沖液是pH值為9.6的濃度為0.03mol/L的碳酸鹽緩沖液；

所述封閉液是將0.01g疊氮化鈉、10g牛血清白蛋白和100mL濃度為0.03mol/L、pH值為7.4磷酸鹽溶液混合得到的溶液。

5.根據權利要求1-4中任一所述的量子點熒光免疫試劑盒，其特征在于：

所述包被原是按照如下方法制備得到的：

將每70mg載體蛋白溶于1mL?0.01M?PBS緩沖液中，再加入30mg乙基二甲氨基碳化二亞胺，25℃攪拌8h，稱為A液；

將40mg喹諾酮類化合物半抗原溶于1mL?0.01M?PBS緩沖液，稱為B液；

將B液加入到A液中，25℃攪拌反應12h，將得到的產物透析，得到所述包被原；

所述喹諾酮化合物半抗原的結構式如式II所示：

6.根據權利要求1-5中任一所述的量子點熒光免疫試劑盒，其特征在于：

所述喹諾酮化合物半抗原是按照如下方法制備得到的：I、將每320mg喹諾酮化合物與143μL?4-溴丁酸乙酯共溶于100mL二甲基亞砜中，再加入700mg碳酸鉀和30mg碘化鈉，70℃回流提取3天，再靜置1天；II、用乙酸乙酯對步驟I得到的產物進行萃取，取有機相，將有機相干燥，得固體殘留物；III、將固體殘留物加到2mL?1M氫氧化鈉水溶液和500μL乙醇中，70℃反應8h，得到喹諾酮半抗原。

7.根據權利要求1-6中任一所述的量子點熒光免疫試劑盒，其特征在于：

所述量子點標記抗抗體為量子點QD650標記羊抗鼠抗抗體；

所述載體蛋白為鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或血藍蛋白，優選為卵清蛋白；

所述喹諾酮類化合物為環丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、達氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、麻保沙星、氨氟沙星、培氟沙星或依諾沙星。