[發(fā)明專利]游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010243013.3
• 申請日: 2010-08-03
• 公開（公告）號: CN101949942A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高曉丹;陳曉玲;劉保鑫;付光宇;渠海;馬建軍;項立紅;吳學煒;苗擁軍
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州安圖綠科生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物免疫檢測領(lǐng)域，尤其是涉及一種將酶促化學發(fā)光技術(shù)與磁分離技術(shù)相結(jié)合的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，本發(fā)明還涉及該試劑盒的制備方法。

背景技術(shù)

人體甲狀腺可以分泌有生理活性的甲狀腺素(T4)和三碘甲狀腺原氨酸(T3)及無生理活性的反T3等。血漿中的T4來自甲狀腺，而80-90％的T3和反T3是T4在外周組織經(jīng)脫去一個碘原子而生成的。血液中的T3和T4，以結(jié)合和游離兩種形式存在。絕大部分的甲狀腺激素(T499.97％，T399.7％)可逆性的結(jié)合于血漿蛋白上，游離的甲狀腺激素在血中含量甚微，與蛋白結(jié)合的激素和微量游離激素處于動態(tài)平衡中，而正是這些微量的游離激素才能進入靶組織細胞，與細胞中受體結(jié)合，發(fā)揮其生物學作用，它還在垂體部分反饋性地調(diào)節(jié)促甲狀腺激素(TSH)的分泌。結(jié)合型的甲狀腺激素是沒有生物學作用的，它對穩(wěn)定血中游離激素含量起著貯存與緩沖作用。

T3分子量為651，大約25％由甲狀腺直接產(chǎn)生，75％由T4在外周組織，主要在肝、腎中經(jīng)5`-脫碘酶的作用形成，其每日周轉(zhuǎn)率約為75％，甲狀腺外循環(huán)總量約40μg，循環(huán)血中T3的生物半壽期，即T1/2僅1天，在外周血液中，99.6％與甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)及白蛋白結(jié)合，一般不和甲狀腺結(jié)合前白蛋(TBPA)結(jié)合，但當TBG濃度低時可與TBPA結(jié)合。但血漿中的T3和蛋白質(zhì)的結(jié)合能力相對于T4較弱，與TBG的親和常數(shù)僅為T4的1/10。

T3是目前已知生物活性最強的甲狀腺激素，其生物活性為T4的3～5倍。外周組織中約有80％的T4經(jīng)脫碘酶的作用而生成T3。因此，有人提出T3是真正的甲狀腺激素，而T4可能是一種前激素。臨床上一般將未與TBG等傳輸?shù)鞍捉Y(jié)合的T3稱為游離T3，即FT3，只有游離的T3具有代謝活性，而結(jié)合的則沒有生理活性。

大量的實驗資料表明，測定血清T3是判斷甲狀腺功能亢進首選指標之一，特別是T3毒血癥患者的血清T4濃度正常，而T3卻明顯升高。因此，測定血清T3是臨床診斷甲狀腺功能的一項重要指標。一般來講，甲亢病人血清T3值會明顯升高。在多數(shù)甲亢病例中，血清T3的升高和血清T4升高相平行；而T3毒癥，亦稱T3性甲亢中，血清T4值在正常范圍，而僅T3升高。臨床上常見到某些病人在發(fā)展成典型的甲狀腺毒癥前，先經(jīng)過一個血清T3水平升高階段，說明測定血清T3對于診斷甲亢較測定血清T4更有意義。此外在甲亢病人進行放射性碘或藥物治療過程中，血清T4降至正常，而血清T3仍高于正常，直至臨床甲狀腺功能恢復正常，血清T3方降至正常水平；故測定血清T3又可作為判斷療效的可靠指標。

因為T3在血液中的濃度變化快于T4且更明顯，所以血液T3水平的測定也可用于應(yīng)答興奮和抑制試驗中以評價甲狀腺機能。一般認為，在甲狀腺強興奮條件下，T3水平是代表甲狀腺功能的一項很好的指標。

但某些疾病如肝硬變，蛋白質(zhì)及熱量營養(yǎng)不良時，血清T3可能降低；但只要甲狀腺功能正常，血清T4則在正常范圍。所以，作為評定甲狀腺功能低下的指標，測定血清T3不如T4可靠。

近年來人們發(fā)現(xiàn)測定血清中游離甲狀腺激素具有更重要的意義。雖然游離T3即FT3在外周血中含量很低，僅占總T3的0.3％，但它可以通過細胞膜進入細胞與受體結(jié)合發(fā)揮生理效應(yīng)，因此它是甲狀腺激素發(fā)生生理效應(yīng)的真正活性部分，能比較確切地反映甲狀腺的功能狀態(tài)及其它對人體機能的影響。

一般甲亢病人血清FT3值明顯升高。在多數(shù)甲亢病例中，血清FT3的升高和血清FT4升高相平行。而T3毒癥，亦稱T3性甲亢中，血清FT4值在正常范圍，而僅FT3升高。臨床上常見到某些病人在發(fā)展成典型的甲狀腺毒癥前，先經(jīng)過一個血清FT3水平升高階段，進而說明測定血清FT3對于診斷甲亢較測定血清FT4更有意義。此外，在甲亢病人進行放射性碘或藥物治療過程中，血清FT4降至正常，而血清FT3仍高于正常，直至臨床甲狀腺功能恢復正常，血清FT3方降至正常水平。故測定血清FT3又可以作為判斷療效的可靠指標。

從檢測原理上來講，目前臨床上常用的檢測游離三碘甲狀腺原氨酸的方法主要是競爭法。

從檢測技術(shù)上來講，過去以放免為代表的早期FT3、FT4測定試劑盒受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應(yīng)用較多的為酶聯(lián)免疫技術(shù)和化學發(fā)光技術(shù)?；瘜W發(fā)光技術(shù)興起于上個世紀80年代，是繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放免技術(shù)之后發(fā)展起來的新興技術(shù)，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結(jié)合物穩(wěn)定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發(fā)展。