[發明專利]游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201010243013.3
• 申請日: 2010-08-03
• 公開（公告）號: CN101949942A
• 公開（公告）日: 2011-01-19
• 發明（設計）人: 高曉丹;陳曉玲;劉保鑫;付光宇;渠海;馬建軍;項立紅;吳學煒;苗擁軍
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖綠科生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

1.一種游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：它包括包被有二碘甲狀腺原氨酸--明膠的磁微粒混懸液、游離三碘甲狀腺原氨酸系列校準品、辣根過氧化物酶標記的游離三碘甲狀腺原氨酸抗體、發光底物A液、發光底物B液及磷酸鹽緩沖液。

2.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述包被有二碘甲狀腺原氨酸--明膠的磁微粒混懸液中的磁微粒粒徑為0.8-1.5um，表面含有濃度為20-30ueq/g的羧基活性基團。

3.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述游離三碘甲狀腺原氨酸系列校準品采用激素血清為基質，加入三碘甲狀腺原氨酸純品配制而成。

4.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標記的游離三碘甲狀腺原氨酸抗體采用碳二亞胺標記法。

5.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述發光底物A液由0.2M?Tris-Hcl、0.15mM?Luminol、0.59mM羥基香豆素、0.35mM沒食子酸組成。

6.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述發光底物B液由0.2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、0.85mM氨基酸氧化酶、0.8％tween?20、0.5mM?DTPA、0.12mM維生素C組成。

7.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述濃縮洗液為加有穩定劑和表面活性劑的磷酸鹽緩沖液。

8.根據權利要求1所述的游離三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：它包括下述步驟：

第一步，包被有二碘甲狀腺原氨酸--明膠的磁微粒混懸液的制備

根據使用量取適量的羧基磁微粒，用過量的EDC和NHS在酸性條件下進行活化，活化時間為30min，然后加磁場，靜置，使磁微粒與液體分開，棄去上清，用PH為7.6的0.01M的磷酸鹽緩沖液洗去多余的活化劑；加入二碘甲狀腺原氨酸--明膠，使其濃度為0.2ul/mg磁微粒，在弱堿性條件下震蕩反應1h；反應結束后加磁場，靜置使磁微粒與液體分開，棄去上清，用含有1％牛血清白蛋白的0.01M的磷酸鹽緩沖液進行封閉；并用封閉液保存磁微粒，得到磁微粒濃度為0.5mg/ml的混懸液；將該磁微粒混懸液置于2-8度保存備用；

第二步，游離三碘甲狀腺原氨酸系列校準品的制備

用含有0.05％-0.1％的NaN3和0.15％-0.25％的PC300的去激素血清將三碘甲狀腺原氨酸純品配制成標示濃度為0pmol/l、2pmol/l、5pmol/l、10pmol/l、25pmol/l、50pmol/l的一系列校準品；

第三步，辣根過氧化物酶標記的游離三碘甲狀腺原氨酸抗體的制備

采用碳二亞胺標記法：先用活化劑EDC將辣根過氧化物酶上的氨基活化，然后加入鼠抗游離三碘甲狀腺原氨酸單克隆抗體，使抗體上的羧基與活化過的氨基縮合為酰胺化合物，透析后既得三碘甲狀腺原氨酸酶標抗體；在標記好的溶液中，等比加入甘油-20度保存備用；

第四步，發光底物A液的配制

發光底物A液由0.2M?Tris-Hcl、0.15mM?Luminol、0.59mM羥基香豆素、0.35mM沒食子酸配制而成。

第五步，發光底物B液的配制

發光底物B液由0.2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、0.85mM氨基酸氧化酶、0.8％tween20、0.5mM?DTPA、0.12mM維生素C配制而成。

第六步，濃縮洗液的配制

取NaH2PO4·2H2O，4.06g；Na2HPO4·12H2O，62.32g；NaCl，175.6g；Tween20，2-10ml；蒸餾水，1000ml配制后得到20倍濃縮洗液。