[發(fā)明專利]成體大鼠肝臟卵圓細胞系及其用途有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010240107.5 | 申請日： | 2010-07-29 |
| 公開（公告）號： | CN102344903A | 公開（公告）日： | 2012-02-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王萍;賈繼東;尤紅;馬紅;叢敏;劉天會;唐淑珍 | 申請（專利權(quán)）人： | 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;A61L27/38;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司 11257 | 代理人： | 張文祎 |
| 地址： | 100050*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 成體 大鼠 肝臟 細胞系 及其 用途 | ||
1.一種成體大鼠肝臟卵圓細胞系rHOC，于2010年7月23日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC?No.4057。
2.權(quán)利要求1所述的成體大鼠肝臟卵圓細胞系rHOC，其特征在于所述細胞具有以下生物學(xué)特性：
(1)細胞呈典型的上皮細胞形態(tài)，連續(xù)傳代培養(yǎng)100代仍保持該形態(tài)特點；
(2)細胞具有較強的增殖能力，但生長存在接觸抑制和密度抑制現(xiàn)象，連續(xù)傳代培養(yǎng)100代仍保持該增殖和生長特性；
(3)細胞表達肝臟前體細胞標(biāo)志物：肝臟卵圓細胞標(biāo)志物、Notch配基Delta樣蛋白、甲胎蛋白、白蛋白、細胞角蛋白19，連續(xù)傳代培養(yǎng)100代細胞仍保持上述免疫表型。
3.權(quán)利要求1所述的成體大鼠肝臟卵圓細胞系rHOC的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
(1)用含0.1％乙硫氨酸的膽堿缺乏性飼料喂養(yǎng)大鼠6周；
(2)麻醉大鼠后無菌條件下行門靜脈插管，并進行原位灌流以去除血細胞；
(3)切下肝組織，用含0.1％膠原酶溶液循環(huán)灌注以離散肝組織；
(4)將步驟(3)灌流后的肝組織置于120目銅網(wǎng)上剪碎組織并研磨以獲得單細胞懸液；
(5)收集步驟(4)的單細胞懸液并于4℃條件下1500rpm離心5分鐘以得到細胞沉淀；
(6)將步驟(5)的細胞沉淀重懸于蛋白酶E溶液中37℃孵育60分鐘以去除肝細胞；
(7)加入等體積的含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基，混合均勻后經(jīng)孔徑20μm尼龍膜過濾；
(8)將濾液上樣至1.35g/ml和1.70g/ml?Percoll不連續(xù)密度梯度介質(zhì)上，4℃條件下2000rpm離心20分鐘；
(9)收集兩層密度梯度介質(zhì)間的細胞，用含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基洗3次，于4℃條件下1,500rpm離心5分鐘，棄去上清液；
(10)將步驟(9)的細胞沉淀重懸于完全培養(yǎng)基中，按2.5×104/cm2接種細胞懸液于膠原包被的組織培養(yǎng)皿中，置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
(11)每隔2天更換新鮮的完全培養(yǎng)基一次；
(12)待細胞形成克隆后，應(yīng)用克隆環(huán)挑取上皮細胞克隆置于新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，即得成體大鼠肝臟卵圓細胞。
4.權(quán)利要求1所述的成體大鼠肝臟卵圓細胞系rHOC在體內(nèi)外定向誘導(dǎo)肝細胞中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述的成體大鼠肝臟卵圓細胞系rHOC在制備生物人工肝中的應(yīng)用。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院，未經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201010240107.5/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
